| 摘要 | 第8-10页 |
| 中英文对照及缩略词 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-24页 |
| 1 脂肪组织概述 | 第11-12页 |
| 2 PPARy与脂肪细胞分化的关系 | 第12-13页 |
| 3 FoxO1的研究 | 第13-15页 |
| 3.1 FoxO1的结构特征和组织间的分布 | 第13-14页 |
| 3.2 FoxO1蛋白的修饰 | 第14页 |
| 3.3 FoxO1调节能量代谢 | 第14-15页 |
| 4 关于miRNA的研究 | 第15-17页 |
| 4.1 miRNA的合成 | 第15-16页 |
| 4.2 miRNA的作用方式 | 第16页 |
| 4.3 miRNA调节脂肪代谢的作用 | 第16-17页 |
| 5 本研究的目的与意义 | 第17-18页 |
| 参考文献 | 第18-24页 |
| 第二章 调节FoxO1基因的miRNA的生物信息学预测及其过表达载体的构建 | 第24-39页 |
| 1 材料与方法 | 第24-31页 |
| 1.1 试验材料 | 第24页 |
| 1.2 主要试剂和仪器 | 第24-26页 |
| 1.2.1 试剂 | 第24-25页 |
| 1.2.2 主要仪器 | 第25页 |
| 1.2.3 溶液配制 | 第25-26页 |
| 1.3 miRNA生物信息学预测 | 第26页 |
| 1.4 FoxO1-3' UTR载体构建 | 第26-31页 |
| 1.4.1 引物设计与合成 | 第26-27页 |
| 1.4.2 总RNA提取 | 第27页 |
| 1.4.3 反转录为cDNA | 第27-28页 |
| 1.4.4 FoxO1-3' UTR PCR扩增 | 第28页 |
| 1.4.5 PCR扩增产物检测 | 第28-29页 |
| 1.4.6 FoxO1-3' UTR PCR扩增产物胶回收和纯化 | 第29页 |
| 1.4.7 双荧光报告载体pmir-GLO质粒扩增和提取 | 第29-30页 |
| 1.4.8 Pmir-GLO质粒和FoxO1-3' UTR扩增产物双酶切 | 第30页 |
| 1.4.9 酶切产物的连接 | 第30-31页 |
| 1.4.10 连接产物的转化 | 第31页 |
| 1.4.11 菌落扩增和菌液测序 | 第31页 |
| 2 结果 | 第31-35页 |
| 2.1 预测的与FoxO1具有靶标关系的miRNAs | 第31-32页 |
| 2.2 FoxO1-3' UTR载体构建结果 | 第32-35页 |
| 2.2.1 总RNA的检测情况 | 第32页 |
| 2.2.2 绵羊FoxO1-3' UTR的PCR扩增和酶切结果 | 第32-33页 |
| 2.2.3 绵羊pmir-FoxO1双荧光报告载体构建结果 | 第33-35页 |
| 3 讨论 | 第35-36页 |
| 3.1 miRNA生物信息学预测 | 第35-36页 |
| 3.2 FoxO1-3' UTR载体构建 | 第36页 |
| 4 小结 | 第36-37页 |
| 参考文献 | 第37-39页 |
| 第三章 miR-142和miR-144与FoxO1靶标关系的验证及对绵羊脂代谢的调控 | 第39-62页 |
| 1 材料与方法 | 第39-51页 |
| 1.1 试验材料 | 第39页 |
| 1.2 试验试剂 | 第39-41页 |
| 1.2.1 主要试剂 | 第39-40页 |
| 1.2.2 溶液的配制 | 第40-41页 |
| 1.3 细胞的培养 | 第41-43页 |
| 1.3.1 绵羊原代脂肪细胞的培养 | 第41-42页 |
| 1.3.2 细胞传代 | 第42页 |
| 1.3.3 细胞冻存 | 第42页 |
| 1.3.4 细胞复苏 | 第42页 |
| 1.3.5 绵羊前体脂肪细胞的分化 | 第42-43页 |
| 1.3.6 HEK293T细胞的培养 | 第43页 |
| 1.3.7 细胞的转染 | 第43页 |
| 1.4 双荧光素酶的检测 | 第43-44页 |
| 1.5 荧光定量PCR分析 | 第44-47页 |
| 1.5.1 miR-142和miR-144特异性反转录茎环引物的设计 | 第44页 |
| 1.5.2 基因的引物设计 | 第44页 |
| 1.5.3 RNA的提取 | 第44-45页 |
| 1.5.4 miR-142和miR-144表达量的测定 | 第45-46页 |
| 1.5.5 基因mRNA表达量的测定 | 第46-47页 |
| 1.6 Western blotting技术分析 | 第47-50页 |
| 1.6.1 细胞总蛋白的提取 | 第47页 |
| 1.6.2 BCA蛋白含量检测流程 | 第47-48页 |
| 1.6.3 SDS-PAGE电泳 | 第48-49页 |
| 1.6.4 蛋白完整性检测 | 第49页 |
| 1.6.5 转膜 | 第49页 |
| 1.6.6 封闭 | 第49页 |
| 1.6.7 孵育抗体 | 第49-50页 |
| 1.6.8 曝光 | 第50页 |
| 1.6.9 Westrn blot结果的分析 | 第50页 |
| 1.7 前体脂肪细胞分化检测 | 第50-51页 |
| 1.8 数据分析 | 第51页 |
| 2 结果 | 第51-56页 |
| 2.1 传代后的细胞形态 | 第51-52页 |
| 2.2 共转染HEK293T验证候选靶基因 | 第52页 |
| 2.3 过表达miR-142对FoxO1和PPARγ mRNA表达的影响 | 第52-53页 |
| 2.4 过表达miR-144对FoxO1和PPARγ mRNA表达的影响 | 第53-54页 |
| 2.5 过表达miR-142和miR-144对FoxO1蛋白表达的影响 | 第54-55页 |
| 2.6 过表达miR-142和miR-144对脂肪细胞分化的影响 | 第55-56页 |
| 3 讨论 | 第56-58页 |
| 3.1 miR-142和miR-144与FoxO1靶标结合情况 | 第56-57页 |
| 3.2 miRNAs、FoxO1和PPARγ在调控脂肪代谢中的关系 | 第57-58页 |
| 3.3 miR-142和miR-144调控脂肪细胞分化 | 第58页 |
| 4 小结 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-62页 |
| 全文结论 | 第62-63页 |
| 创新与特色 | 第63-64页 |
| Abstract | 第64-65页 |
| 附录 在读期间发表论文情况 | 第66-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
