摘要 | 第3-4页 |
Abstract | 第4-5页 |
1 前言 | 第9-27页 |
1.1 高等植物花器官发育的基本过程 | 第9-10页 |
1.2 花药与花粉发育过程 | 第10-13页 |
1.3 花粉表面的结构 | 第13-15页 |
1.4 绒毡层发育基本过程 | 第15-16页 |
1.5 花粉壁结构、组成与功能 | 第16-18页 |
1.6 花粉壁发育 | 第18-22页 |
1.6.1 胼胝质合成 | 第19页 |
1.6.2 初生外壁的定位与细胞膜的波浪状 | 第19-21页 |
1.6.3 外壁外层的沉积 | 第21页 |
1.6.4 外壁内层的沉积 | 第21-22页 |
1.6.5 花粉内壁的沉积 | 第22页 |
1.7 花粉包被的沉积 | 第22-24页 |
1.8 绒毡层形成的关键基因调控网络 | 第24-26页 |
1.9 本研究工作的价值和主要内容 | 第26-27页 |
2 材料与方法 | 第27-48页 |
2.1 材料 | 第27-30页 |
2.1.1 植物材料 | 第27页 |
2.1.2 菌株和质粒 | 第27页 |
2.1.2.1 菌株 | 第27页 |
2.1.2.2 质粒载体 | 第27页 |
2.1.3 抗生素 | 第27-28页 |
2.1.4 试剂 | 第28页 |
2.1.5 培养基配方 | 第28-29页 |
2.1.6 仪器 | 第29-30页 |
2.2 实验方法 | 第30-48页 |
2.2.1 拟南芥的种植 | 第30页 |
2.2.2 CTAB法提取植物总DNA | 第30-31页 |
2.2.3 目的基因的PCR扩增 | 第31页 |
2.2.4 PCR鉴定阳性克隆 | 第31页 |
2.2.5 碱解法抽提质粒DNA | 第31-32页 |
2.2.6 双酶切反应体系 | 第32页 |
2.2.7 T4连接体系 | 第32页 |
2.2.8 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第32-33页 |
2.2.9 农杆菌感受态细胞的制备 | 第33页 |
2.2.10 农杆菌的转化 | 第33页 |
2.2.11 拟南芥的转化 | 第33-34页 |
2.2.12 拟南芥RNA的抽提 | 第34页 |
2.2.13 植物总RNA的纯化 | 第34-35页 |
2.2.14 RNA反转录体系 | 第35页 |
2.2.15 定量RT-PCR | 第35-36页 |
2.2.16 转基因植株的筛选 | 第36页 |
2.2.17 烟草瞬时转化实验 | 第36页 |
2.2.18 原核表达蛋白及纯化 | 第36-39页 |
2.2.19 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第39页 |
2.2.20 染色质免疫共沉淀(ChIP) | 第39-42页 |
2.2.21 凝胶电泳迁移率实验(EMSA) | 第42-43页 |
2.2.22 原位杂交 | 第43-48页 |
3 实验结果 | 第48-71页 |
3.1 MS1在绒毡层转录因子遗传通路中处于MS188下游 | 第48-49页 |
3.2 MS188可以直接结合MS1的启动子 | 第49-53页 |
3.3 MS188能够直接激活MS1的表达 | 第53-54页 |
3.4 Pollencoat相关基因处于MS1的下游 | 第54-55页 |
3.5 MS1与Pollencoat荧光融合蛋白载体的构建 | 第55-58页 |
3.6 MS1与Pollencoat相关蛋白皆在小孢子发生过程中的绒毡层中表达 | 第58-60页 |
3.7 MS1在体内能够直接结合GRP14和GRP19的启动子 | 第60-63页 |
3.8 MS1包含PHD-finger结构域的C端部分能够特异结合DNA元件. | 第63-67页 |
3.9 MS1直接激活GRP14和GRP19基因的表达 | 第67-68页 |
3.10 PCPs基因转录启动依赖于MS1的正常表达 | 第68-71页 |
4 讨论 | 第71-76页 |
4.1 花粉包被相关蛋白在花药中的表达模式和定位 | 第71-72页 |
4.2 MS1直接调控花粉包被蛋白基因的表达 | 第72-74页 |
4.3 绒毡层的遗传途径体现着对花粉发育控制的层次性 | 第74-76页 |
参考文献 | 第76-82页 |
附录 | 第82-88页 |
发表论文 | 第88-89页 |
致谢 | 第89-90页 |