| 摘要 | 第10-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 缩略词中英文对照表 | 第16-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-39页 |
| 1 前言 | 第18-19页 |
| 1.1 脂肪组织的形成 | 第18-19页 |
| 1.2 白色、棕色以及米色脂肪细胞 | 第19页 |
| 2 不同组织中脂质的作用 | 第19-23页 |
| 2.1 脂肪组织的异位积累 | 第20页 |
| 2.2 肝脏中甘油三酯 | 第20-21页 |
| 2.3 血管外周及心外膜脂质 | 第21-22页 |
| 2.4 血管周脂肪组织 | 第22页 |
| 2.5 心肌脂肪 | 第22-23页 |
| 3 脂质代谢调控 | 第23-25页 |
| 3.1 脂质生成的定义 | 第23页 |
| 3.2 脂质生成的转录调控 | 第23-24页 |
| 3.3 脂质生成的后转录调控 | 第24页 |
| 3.4 脂质生成的激素调节 | 第24-25页 |
| 4 骨骼肌肌内脂肪沉积 | 第25-26页 |
| 4.1 肌内脂肪与胰岛素抵抗 | 第25页 |
| 4.2 现代猪育种追求高肌内脂肪含量 | 第25-26页 |
| 4.3 寻找肌内脂肪maker是现代猪育种趋势 | 第26页 |
| 5FGF21 | 第26-32页 |
| 5.1 FGF21生物学功能 | 第27页 |
| 5.2 调节FGF21生物学功能的受体 | 第27-28页 |
| 5.3 FGF21在机体不同组织中的调节作用 | 第28-32页 |
| 5.3.1 FGF21在肝脏中的作用 | 第28页 |
| 5.3.2 FGF21信号转导机制 | 第28-29页 |
| 5.3.3 FGF21对于糖脂类代谢的调节机制 | 第29页 |
| 5.3.4 FGF21在白色脂肪中的作用 | 第29-30页 |
| 5.3.5 FGF21作用于中枢神经调控脂质代谢 | 第30-31页 |
| 5.3.6 FGF21在胰腺中的作用 | 第31-32页 |
| 5.4 FGF21参与肌肉发育和肌内脂肪代谢 | 第32页 |
| 6 脂联素与其受体激动剂AdipoRon | 第32-38页 |
| 6.1 脂联素的结构、合成和转录修饰 | 第33-34页 |
| 6.2 脂联素受体 | 第34页 |
| 6.3 脂联素下游信号 | 第34-36页 |
| 6.4 在关键代谢组织中的脂联素信号 | 第36-37页 |
| 6.4.1 脂联素信号在骨骼肌中的作用 | 第36-37页 |
| 6.4.2 脂联素在脂肪细胞和脂肪组织中的作用 | 第37页 |
| 6.5 脂联素受体激动剂AdipoRon | 第37-38页 |
| 6.5.1 AdipoRon和胰岛素抵抗 | 第37页 |
| 6.5.2 AdipoRon与心血管功能 | 第37-38页 |
| 7 研究目的与意义 | 第38-39页 |
| 第二章 材料与方法 | 第39-77页 |
| 1 实验材料 | 第39-44页 |
| 1.1 细胞株和细胞系 | 第39页 |
| 1.2 载体 | 第39页 |
| 1.3 主要仪器与设备 | 第39-40页 |
| 1.4 主要试剂及耗材 | 第40-42页 |
| 1.5 常用试剂及其配置 | 第42-44页 |
| 1.6 主要分子生物学软件及数据库 | 第44页 |
| 2 实验方法 | 第44-77页 |
| 2.1 猪胎儿肌内前体脂肪细胞(IMF)株的建立与培养 | 第44-46页 |
| 2.1.1 猪IMF细胞株的建立 | 第44-45页 |
| 2.1.2 猪IMF细胞株的传代 | 第45页 |
| 2.1.3 猪IMF细胞株的冷冻 | 第45-46页 |
| 2.1.4 猪IMF细胞株的鉴定 | 第46页 |
| 2.2 猪源FGF21稳转细胞株 | 第46-53页 |
| 2.2.1 猪源FGF21基因全长CDS序列的PCR扩增 | 第46-47页 |
| 2.2.2 PCR产物的凝胶电泳及回收 | 第47-48页 |
| 2.2.3 回收的DNA片段的TA克隆与转化 | 第48-49页 |
| 2.2.4 TA阳性克隆的筛选检测与测序 | 第49页 |
| 2.2.5 含目的基因的T载体的质粒提取 | 第49-50页 |
| 2.2.6 目的基因真核表达载体的构建 | 第50-52页 |
| 2.2.7 质粒的双酶切验证 | 第52页 |
| 2.2.8 含猪FGF21基因CDS序列的质粒的瞬时转染 | 第52-53页 |
| 2.3 超表达猪FGF21基因的稳定细胞株的筛选 | 第53-58页 |
| 2.3.1 细胞转染 | 第53-54页 |
| 2.3.2 细胞总RNA的提取 | 第54-55页 |
| 2.3.3 单链cDNA的合成 | 第55页 |
| 2.3.4 实时定量PCR | 第55-56页 |
| 2.3.5 细胞总蛋白质的提取 | 第56-57页 |
| 2.3.6 蛋白质免疫印迹WesternBlot | 第57-58页 |
| 2.4 稳定细胞株中FGF21对成脂分化基因的调控 | 第58-60页 |
| 2.5 CEBPβ启动子区DNA甲基化分析 | 第60-64页 |
| 2.5.1 CEBPβ启动子区域DNA的处理 | 第60-61页 |
| 2.5.2 PCR扩增 | 第61-62页 |
| 2.5.3 PCR产物的回收 | 第62-63页 |
| 2.5.4 目的片段与T载体连接 | 第63页 |
| 2.5.5 阳性菌落的筛选与测序 | 第63页 |
| 2.5.6 甲基化结果分析 | 第63-64页 |
| 2.6 电泳迁移率实验(ElectrophoreticMobilityShiftAssay,EMSA) | 第64-68页 |
| 2.7 染色质免疫沉淀(ChromatinImmunoprecipitationAssay) | 第68-70页 |
| 2.7.1 交联与细胞裂解 | 第68页 |
| 2.7.2 酶解断裂染色质 | 第68-69页 |
| 2.7.3 免疫沉淀蛋白-DNA复合物 | 第69页 |
| 2.7.4 65?C解交联蛋白质和DNA复合物 | 第69-70页 |
| 2.7.5 消化蛋白,纯化富集的DNA | 第70页 |
| 2.8 AdipoRon药物处理 | 第70-71页 |
| 2.9 代谢笼实验 | 第71页 |
| 2.10 肝脏和白色脂肪组织westernblot | 第71页 |
| 2.11 高胰岛素-正常血糖钳夹实验(Hyperinsulinemic–EuglycemicClamp) | 第71-76页 |
| 2.11.1 小鼠插管手术 | 第71页 |
| 2.11.2 Hyperinsulinemic–EuglycemicClamp(以下简称clamp) | 第71-73页 |
| 2.11.3 TracerAssay([3-3H]glucose,2-[14C]DG,and3H2O) | 第73页 |
| 2.11.4 FGF21的酶联免疫吸附测定(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)试验 | 第73-74页 |
| 2.11.5 血清游离脂肪酸(NEFA)浓度测定 | 第74-75页 |
| 2.11.6 Palmitateturnover | 第75页 |
| 2.11.7 AcetylCoAturnover | 第75-76页 |
| 2.11.8 Glycerolturnover | 第76页 |
| 2.12 数据统计分析方法 | 第76-77页 |
| 第三章 结果与分析 | 第77-93页 |
| 1 肌内脂肪(IMF)原代细胞的建立与鉴定 | 第77-78页 |
| 1.1 IMF原代细胞的分离与培养 | 第77页 |
| 1.2 IMF细胞株的鉴定 | 第77-78页 |
| 2 FGF21抑制前体脂肪细胞的成脂分化 | 第78-84页 |
| 2.1 FGF21稳转细胞株的建立 | 第78页 |
| 2.2 FGF21抑制IMF细胞成脂分化 | 第78-82页 |
| 2.2.1 FGF21抑制IMF细胞脂滴的形成 | 第78-79页 |
| 2.2.2 FGF21抑制甘油三酯合成相关基因的表达 | 第79-82页 |
| 2.3 转录因子CEBPβ抑制FGF21基因的转录 | 第82-84页 |
| 3 AdipoRon没有改变白色脂肪组织分解代谢作用 | 第84-87页 |
| 3.1 AdipoRon没有改变低脂饲料喂养小鼠白色脂肪组织脂肪分解 | 第84-85页 |
| 3.2 AdipoRon没有改变clamp实验中葡萄糖注射速率 | 第85-86页 |
| 3.3 AdipoRon没有改变低脂饲喂小鼠的肝脏胰岛素敏感性 | 第86-87页 |
| 4 AdipoRon抑制高脂饮食小鼠白色脂肪组织中脂解作用 | 第87-92页 |
| 4.1 AdipoRon提高小鼠白色脂肪组织含量 | 第87-88页 |
| 4.2 AdipoRon提高clamp中葡萄糖注射速率 | 第88-89页 |
| 4.3 AdipoRon抑制clamp中内源葡萄糖的产生 | 第89-90页 |
| 4.4 AdipoRon抑制游离脂肪酸的产生 | 第90页 |
| 4.5 AdipoRon降低棕榈酸和甘油的代谢率 | 第90-91页 |
| 4.6 AdipoRon降低肝脏内乙酰辅酶A含量 | 第91-92页 |
| 5 AdipoRon加强PPARα-FGF21信号抑制脂肪分解 | 第92-93页 |
| 第四章 讨论 | 第93-100页 |
| 1 FGF21下调脂肪细胞分化关键基因 | 第93-94页 |
| 2 FGF21参与脂分化关键基因的表达调控 | 第94-95页 |
| 3 FGF21减少肌肉内甘油三酯的沉积 | 第95页 |
| 4 FGF21激活FGFR信号通路 | 第95-97页 |
| 5 AdipoRon不改变低脂饲喂小鼠白色脂肪组织脂肪分解作用 | 第97页 |
| 6 AdipoRon抑制高脂饲喂小鼠白色脂肪组织脂肪分解作用 | 第97-100页 |
| 第五章 结论 | 第100-102页 |
| 1 本研究得到的结论 | 第100页 |
| 2 本研究的创新点与特色 | 第100-101页 |
| 3 不足之处 | 第101页 |
| 4 下一步计划 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-130页 |
| 在读期间发表论文列表 | 第130-132页 |
| 致谢 | 第132-134页 |
