| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第11-27页 |
| 1.1 引言 | 第11-14页 |
| 1.2 甲羟戊酸的应用及市场 | 第14-16页 |
| 1.2.1 甲羟戊酸的简介 | 第14-15页 |
| 1.2.2 甲羟戊酸的用途及市场价值 | 第15-16页 |
| 1.3 甲羟戊酸的合成途径 | 第16-20页 |
| 1.3.1 甲羟戊酸的化学合成方法 | 第16-17页 |
| 1.3.2 甲羟戊酸的生物合成方法 | 第17-20页 |
| 1.4 本研究中酿酒酵母体内甲羟戊酸合成途径的改造 | 第20-25页 |
| 1.4.1 pESC载体 | 第20-21页 |
| 1.4.2 本研究中酿酒酵母中甲羟戊酸的合成方法 | 第21-25页 |
| 1.5 论文立题依据和实验设计 | 第25-27页 |
| 1.5.1 立题依据 | 第25-26页 |
| 1.5.2 实验设计 | 第26-27页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第27-46页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-31页 |
| 2.1.1 菌株 | 第27页 |
| 2.1.2 载体 | 第27页 |
| 2.1.3 化学试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.4 试剂盒 | 第28页 |
| 2.1.5 实验仪器 | 第28-29页 |
| 2.1.6 实验试剂与培养基的配制方法 | 第29-31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-46页 |
| 2.2.1 合成甲羟戊酸生物途径基因的构建 | 第31-38页 |
| 2.2.2 质粒转化入酿酒酵母BY4741细胞 | 第38-40页 |
| 2.2.3 基因敲除 | 第40-44页 |
| 2.2.4 发酵实验 | 第44-46页 |
| 第3章 实验结果 | 第46-77页 |
| 3.1 相关代谢途径表达载体构建 | 第46-52页 |
| 3.1.1 目的基因的获取 | 第46-48页 |
| 3.1.2 甲羟戊酸合成途径在pESC系列载体上的构建模型 | 第48-49页 |
| 3.1.3 载体构建—菌落PCR验证 | 第49-50页 |
| 3.1.4 载体构建—双酶切验证 | 第50-52页 |
| 3.2 基因敲除 | 第52-57页 |
| 3.2.1 pyk1基因的敲除 | 第52-55页 |
| 3.2.2 ERG8基因敲除 | 第55-57页 |
| 3.3 重组酿酒酵母菌株的构建 | 第57-60页 |
| 3.3.1 菌株的命名 | 第57页 |
| 3.3.2 构建改造酿酒酵母代谢途径的菌株 | 第57-60页 |
| 3.4 代谢途径改造对酿酒酵母生产MVA的影响 | 第60-77页 |
| 3.4.1 葡萄糖对半乳糖的抑制 | 第60-63页 |
| 3.4.2 NOG途径的构建 | 第63-65页 |
| 3.4.3 PPP途径的加强 | 第65-68页 |
| 3.4.4 PPP+NOG途径探究 | 第68-69页 |
| 3.4.5 PPP+NOG+MVA途径探究 | 第69-71页 |
| 3.4.6 比较不同菌属pta基因在甲羟戊酸合成途径中的作用 | 第71-72页 |
| 3.4.7 竞争性EMP途径的削弱 | 第72-75页 |
| 3.4.8 削弱MVA途径下游反应 | 第75-77页 |
| 结论 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-84页 |
| 附录 | 第84-86页 |
| 作者简介 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
