| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩写词表 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-25页 |
| 1.1 三分三简介 | 第11-12页 |
| 1.2 生物碱概述 | 第12页 |
| 1.3 托品烷生物碱概述 | 第12-16页 |
| 1.3.1 莨菪碱（Hyoscyamine） | 第14-15页 |
| 1.3.2 东莨菪碱（Hyoscyamine） | 第15页 |
| 1.3.3 山莨菪碱（Anisodamine） | 第15页 |
| 1.3.4 樟柳碱（Anisodine） | 第15-16页 |
| 1.4 托品烷生物碱的合成方式 | 第16-17页 |
| 1.5 托品烷生物碱的合成途径 | 第17-20页 |
| 1.5.1 腐胺N-甲基转移酶(PMT) | 第18-19页 |
| 1.5.2 托品酮还原酶I(TRI)和托品酮还原酶II(TRII) | 第19页 |
| 1.5.3 莨菪碱6-β羟化酶(H6H) | 第19-20页 |
| 1.6 提高托品烷生物碱含量的方法 | 第20-21页 |
| 1.6.1 单基因或多基因共转化策略 | 第20页 |
| 1.6.2 转录因子调控策略 | 第20-21页 |
| 1.6.3 反义或RNAi干扰策略 | 第21页 |
| 1.6.4 诱导策略 | 第21页 |
| 1.7 WRKY转录因子 | 第21-24页 |
| 1.7.1 WRKY转录因子概述 | 第21-22页 |
| 1.7.2 WRKY转录因子的结构特点 | 第22-23页 |
| 1.7.3 WRKY转录因子的生物学功能 | 第23-24页 |
| 1.8 本课题的研究目的和研究意义 | 第24-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-50页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-29页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第25页 |
| 2.1.2 载体与菌种 | 第25-26页 |
| 2.1.3 主要的仪器设备 | 第26-27页 |
| 2.1.4 常用的试剂 | 第27-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-50页 |
| 2.2.1 三分三无菌苗的快繁 | 第29页 |
| 2.2.2 三分三WRKY转录因子的筛选 | 第29页 |
| 2.2.3 AaWRKYs的进化树分析、序列对比、分组和保守结构域的识别 | 第29-30页 |
| 2.2.4 组织表达谱分析 | 第30-35页 |
| 2.2.5 AaWRKY23基因的克隆 | 第35-37页 |
| 2.2.6 AaWRKY23的亚细胞定位 | 第37-41页 |
| 2.2.7 植物表达载体的构建 | 第41页 |
| 2.2.8 农杆菌C58C1介导的遗传转化 | 第41页 |
| 2.2.9 AaWRKY23转基因毛状根的阳性鉴定 | 第41-43页 |
| 2.2.10 三分三转基因毛状根阳性克隆的qRT-PCR分析 | 第43页 |
| 2.2.11 AaWRKY23转基因三分三毛状根有效成分的检测 | 第43-44页 |
| 2.2.12 酵母单杂交实验 | 第44-47页 |
| 2.2.13 Dual-Luc实验 | 第47-50页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第50-78页 |
| 3.1 目的基因的筛选 | 第50-60页 |
| 3.1.1 AaWRKYs的命名和分类 | 第50-52页 |
| 3.1.2 AaWRKYs的多重序列比对以及保守结构域的识别 | 第52-53页 |
| 3.1.3 托品烷生物碱合成途径中关键酶基因的组织表达谱分析 | 第53-54页 |
| 3.1.4 AaWRKYs的组织表达谱分析 | 第54-59页 |
| 3.1.5 AaWRKYs与其它WRKYs的系统进化树分析 | 第59-60页 |
| 3.2 AaWRKY23基因的克隆 | 第60-61页 |
| 3.3 AaWRKY23的生物信息学分析 | 第61-63页 |
| 3.3.1 AaWRKY23的进化树分析 | 第61-62页 |
| 3.3.2 AaWRKY23的多重序列比对 | 第62页 |
| 3.3.3 AaWRKY23的蛋白质高级结构预测 | 第62-63页 |
| 3.4 AaWRKY23的亚细胞定位分析 | 第63-65页 |
| 3.4.1 载体pHB::AaWRKY23-YFP的构建 | 第63-64页 |
| 3.4.2 亚细胞定位结果分析 | 第64-65页 |
| 3.5 植物表达载体的构建 | 第65-66页 |
| 3.5.1 过表达载体pHB::AaWRKY23-YFP的构建 | 第65-66页 |
| 3.6 农杆菌C58C1介导的三分三外植体的遗传转化 | 第66-67页 |
| 3.7 三分三转基因毛状根的PCR阳性鉴定 | 第67-68页 |
| 3.7.1 pHB-YFP空载转基因毛状根的PCR阳性鉴定 | 第67页 |
| 3.7.2 pHB::AaWRKY23-YFP过表达转基因毛状根的PCR阳性鉴定 | 第67-68页 |
| 3.8 AaWRKY23转基因毛状根的qRT-PCR分析以及HPLC含量测定 | 第68-72页 |
| 3.8.1 AaWRKY23过表达转基因毛状根的筛选 | 第68-69页 |
| 3.8.2 AaWRKY23过表达转基因毛状根株系中TAs生物合成途径中关键酶基因的定量PCR分析 | 第69-70页 |
| 3.8.3 AaWRKY23过表达转基因毛状根中托品烷生物碱含量测定 | 第70-72页 |
| 3.9 酵母单杂实验 | 第72-76页 |
| 3.9.1 placz2u表达载体构建 | 第73-75页 |
| 3.9.2 pB42AD载体的构建 | 第75页 |
| 3.9.3 酵母单杂实验 | 第75-76页 |
| 3.10 Dual-Luc实验 | 第76-78页 |
| 3.10.1 pGreen0800载体的构建 | 第76-77页 |
| 3.10.2 Dual-Luc实验结果分析 | 第77-78页 |
| 第四章 研究总结与展望 | 第78-80页 |
| 4.1 研究总结 | 第78-79页 |
| 4.2 研究展望 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-87页 |
| 论文及成果 | 第87-88页 |
| 致谢 | 第88-90页 |
| 附件 | 第90页 |
