| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第13-23页 |
| 1.1 生物酶热稳定性提高策略 | 第13-14页 |
| 1.1.1 定向进化技术 | 第13页 |
| 1.1.2 定点突变技术 | 第13-14页 |
| 1.1.3 饱和突变技术 | 第14页 |
| 1.1.4 截除技术 | 第14页 |
| 1.1.5 融合技术 | 第14页 |
| 1.2 重组蛋白的表达与纯化 | 第14-18页 |
| 1.2.1 常规可溶重组蛋白表达与纯化 | 第15-16页 |
| 1.2.2 自组装短肽诱导酶聚集体及其分离纯化 | 第16-18页 |
| 1.2.3 自组装短肽对酶的活性影响 | 第18页 |
| 1.3 酶的固定化 | 第18-21页 |
| 1.3.1 酶固定化技术 | 第18-20页 |
| 1.3.2 固定化酶的应用 | 第20-21页 |
| 1.4 论文研究内容及意义 | 第21-23页 |
| 1.4.1 目的意义 | 第21页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第21-22页 |
| 1.4.3 技术路线 | 第22-23页 |
| 第二章 自组装短肽诱导乙酰木聚糖酯酶在大肠杆菌中的克隆与表达 | 第23-45页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第23-29页 |
| 2.2.1 菌株与载体 | 第23-24页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第24-25页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第25-27页 |
| 2.2.4 常用溶液及培养基的配置 | 第27-29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-40页 |
| 2.3.1 pET-AXE-His、pET-AXE-SAPs表达载体的构建 | 第29-34页 |
| 2.3.2 重组乙酰木聚糖酯酶在E.coliBL21(DE3)中的表达与分析 | 第34-36页 |
| 2.3.3 重组乙酰木聚糖酯酶的分离纯化 | 第36-38页 |
| 2.3.4 蛋白浓度的测定 | 第38-39页 |
| 2.3.5 乙酰木聚糖酯酶的酶活测定 | 第39-40页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第40-43页 |
| 2.4.1 重组乙酰木聚糖酯酶的诱导表达 | 第40-43页 |
| 2.4.2 重组乙酰木聚糖酯酶的纯化及脱盐 | 第43页 |
| 2.5 本章小结 | 第43-45页 |
| 第三章 重组乙酰木聚糖酯酶的酶学性质研究及应用 | 第45-54页 |
| 3.1 引言 | 第45页 |
| 3.2 材料与方法 | 第45-48页 |
| 3.2.1 主要试剂 | 第45-46页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第46页 |
| 3.2.3 实验方法 | 第46-48页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第48-53页 |
| 3.3.1 最适反应温度及pH | 第48-49页 |
| 3.3.2 温度稳定性 | 第49-50页 |
| 3.3.3 动力学参数的测定 | 第50页 |
| 3.3.4 重组乙酰木聚糖酯酶催化7-ACA脱乙酰基生成D-7-ACA | 第50-53页 |
| 3.4 本章小结 | 第53-54页 |
| 第四章 自组装短肽诱导β-木糖苷酶在大肠杆菌中的克隆与表达 | 第54-69页 |
| 4.1 引言 | 第54页 |
| 4.2 材料与仪器 | 第54-55页 |
| 4.2.1 菌株与载体 | 第54-55页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第55页 |
| 4.2.3 主要仪器 | 第55页 |
| 4.2.4 主要试剂溶液的配制 | 第55页 |
| 4.3 实验方法 | 第55-62页 |
| 4.3.1 pET-ThXylC-His、pET-ThXylC-SAPs表达载体的构建 | 第55-60页 |
| 4.3.2 重组β-木糖苷酶ThXylC-His与ThXylC-SAPs的表达及分析 | 第60页 |
| 4.3.3 重组β-木糖苷酶的分离纯化 | 第60-61页 |
| 4.3.4 β-木糖苷酶的酶活测定 | 第61-62页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第62-68页 |
| 4.4.1 pET-ThXylC-His、pET-ThXylC-SAPs表达载体的构建 | 第62-64页 |
| 4.4.2 重组β-木糖苷酶ThXylC与ThXylC-SAPs的表达纯化与分析 | 第64-67页 |
| 4.4.3 ThXylC与ThXylC-ELK16的纯化效果及酶活检测 | 第67-68页 |
| 4.5 本章小结 | 第68-69页 |
| 第五章 重组β-木糖苷酶的酶学性质研究及对比 | 第69-73页 |
| 5.1 引言 | 第69页 |
| 5.2 实验仪器与试剂 | 第69页 |
| 5.2.1 主要仪器 | 第69页 |
| 5.2.2 主要试剂 | 第69页 |
| 5.3 实验方法 | 第69-70页 |
| 5.3.1 最适反应温度与最适反应pH的研究 | 第69-70页 |
| 5.3.2 ThXylC、ThXylC-His和ThXylC-ELK16的热稳定性 | 第70页 |
| 5.3.3 ThXylC、ThXylC-His和ThXylC-ELK16动力学参数 | 第70页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第70-72页 |
| 5.4.1 最适反应温度与最适反应pH | 第70-71页 |
| 5.4.2 重组β-木糖苷酶热稳定性研究 | 第71-72页 |
| 5.4.3 动力学参数的测定 | 第72页 |
| 5.5 本章小结 | 第72-73页 |
| 结论与展望 | 第73-75页 |
| 结论 | 第73页 |
| 展望 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-80页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第80-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 附件 | 第83页 |
