| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-11页 |
| 缩略词表 | 第15-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-27页 |
| 1.脂肪间充质干细胞及其旁分泌作用 | 第16-21页 |
| 1.1 脂肪间充质干细胞的发现与优势 | 第16-17页 |
| 1.2 脂肪间充质干细胞的性质与应用 | 第17-18页 |
| 1.3 脂肪间充质干细胞旁分泌作用对毛囊的影响 | 第18-21页 |
| 1.3.1 脂肪间充质干细胞对毛囊生长的影响 | 第18-19页 |
| 1.3.2 脂肪间充质干细胞的旁分泌作用 | 第19-21页 |
| 2.低氧相关因子的作用机理及其对脂肪间充质干细胞的影响 | 第21-25页 |
| 2.1 低氧培养的优势 | 第21-22页 |
| 2.2 缺氧诱导因子-1(hypoxiainduciblefactor1,HIF-1) | 第22-24页 |
| 2.3 低氧模拟物DFO(desferoxamine,DFO) | 第24-25页 |
| 2.4 低氧对脂肪间充质干细胞的影响 | 第25页 |
| 3.展望 | 第25-27页 |
| 第二章 实验研究 | 第27-52页 |
| 引言 | 第27-28页 |
| 1 材料与试剂 | 第28-29页 |
| 1.1 主要仪器设备 | 第28页 |
| 1.2 实验材料 | 第28-29页 |
| 1.3 实验试剂及耗材 | 第29页 |
| 2 实验方法 | 第29-37页 |
| 2.1 细胞培养 | 第29-30页 |
| 2.1.1 gADSCs细胞解冻、传代及冻存 | 第29-30页 |
| 2.1.2 gHFSCs的培养 | 第30页 |
| 2.1.2.1 细胞培养板的准备 | 第30页 |
| 2.1.2.2 gHFSCs的培养、传代与冻存 | 第30页 |
| 2.2 CCK-8活性检测 | 第30-31页 |
| 2.2.1 筛选DFO的处理浓度及处理时间 | 第30-31页 |
| 2.2.2 gHFSCs增殖能力检测 | 第31页 |
| 2.3 观察细胞生长 | 第31页 |
| 2.3.1 gADSCs生长曲线 | 第31页 |
| 2.3.2 gHFSCs生长曲线 | 第31页 |
| 2.4 流式细胞技术检测细胞周期和细胞凋亡 | 第31-32页 |
| 2.4.1 gADSCs流式细胞术检测 | 第31页 |
| 2.4.2 gHFSCs 流式细胞术检测 | 第31-32页 |
| 2.4.2.1 细胞周期检测 | 第32页 |
| 2.4.2.2 细胞凋亡检测 | 第32页 |
| 2.5 ELISA定量检测培养液中毛囊相关生长因子IGF-1、VEGF、bFGF和PDGF的表达 | 第32-33页 |
| 2.6 实时定量PCR检测细胞内HIF-1、VEGF和β-catenin的表达 | 第33-36页 |
| 2.6.1 细胞样品总RNA提取 | 第33-34页 |
| 2.6.2 cDNA合成 | 第34页 |
| 2.6.3 实时定量PCR | 第34-36页 |
| 2.7 蛋白质免疫印迹检测细胞内HIF-1、VEGF和β-catenin的表达 | 第36页 |
| 2.8 使用48h条件培养基培养的gHFSCs,Westernblot分析毛囊相关信号通路中Erk、Akt的表达 | 第36-37页 |
| 3 结果 | 第37-48页 |
| 3.1 gADSCs细胞培养 | 第37页 |
| 3.2 筛选DFO的处理浓度及处理时间 | 第37-38页 |
| 3.3 gADSCs细胞生长曲线 | 第38页 |
| 3.4 细胞周期 | 第38-40页 |
| 3.5 细胞凋亡 | 第40-41页 |
| 3.6 ELISA检测培养液中毛囊相关生长因子IGF-1、VEGF、bFGF和PDGF的表达 | 第41页 |
| 3.7 gHFSCs细胞培养 | 第41-42页 |
| 3.8 gHFSCs细胞生长曲线的绘制 | 第42-43页 |
| 3.9 gHFSCs细胞活性 | 第43页 |
| 3.10 gHFSCs细胞周期 | 第43-45页 |
| 3.11 gHFSCs细胞凋亡 | 第45-46页 |
| 3.12 实时定量PCR检测gHFSCs内HIF-1、VEGF和β-catenin转录的变化 | 第46页 |
| 3.13 实时定量PCR检测ADSCs内HIF-1、VEGF和β-catenin的表达 | 第46-47页 |
| 3.14 蛋白质免疫印迹检测细胞内HIF-1、VEGF和β-catenin的表达 | 第47-48页 |
| 3.15 Westernblot分析毛囊相关信号通路中Erk、Akt的表达 | 第48页 |
| 4.讨论 | 第48-51页 |
| 4.1 低氧模拟物DFO对ADSCs生长、增殖和旁分泌的影响 | 第48-49页 |
| 4.2 ADSCs旁分泌作用对gHFSCs活性、细胞周期、凋亡和相关基因表达的影响 | 第49-50页 |
| 4.3 低氧模拟物DFO培养ADSCs间接促进gHFSCs生长的分子机制 | 第50-51页 |
| 5.结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
