| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-31页 |
| 1.1 氨基酸及其衍生物简介 | 第14-18页 |
| 1.1.1 L-氨基酸的简介 | 第14页 |
| 1.1.2 L-氨基酸的制备方法 | 第14-15页 |
| 1.1.3 L-草铵膦简介 | 第15页 |
| 1.1.4 L-草铵膦的合成方法 | 第15-18页 |
| 1.1.4.1 化学法合成L-草铵膦 | 第15-17页 |
| 1.1.4.2 酶法合成L-草铵膦 | 第17-18页 |
| 1.2 氨基酸脱氢酶法制备L-氨基酸 | 第18-26页 |
| 1.2.1 氨基酸脱氢酶的简介 | 第18-19页 |
| 1.2.2 氨基酸脱氢酶的分类 | 第19-22页 |
| 1.2.2.1 谷氨酸脱氢酶 | 第19-20页 |
| 1.2.2.2 其他氨基酸脱氢酶 | 第20-22页 |
| 1.2.3 氨基酸脱氢酶制备L-氨基酸的应用 | 第22-24页 |
| 1.2.4 辅酶的循环再生系统 | 第24-26页 |
| 1.2.4.1 底物偶联法 | 第25页 |
| 1.2.4.2 酶偶联法 | 第25-26页 |
| 1.3 微生物培养的优化方法 | 第26-29页 |
| 1.3.1 培养基的优化方法 | 第26-29页 |
| 1.3.2 培养工艺的优化 | 第29页 |
| 1.4 本课题的研究思路及主要内容 | 第29-31页 |
| 第二章 谷氨酸脱氢酶重组菌的产酶工艺优化 | 第31-49页 |
| 2.1 引言 | 第31页 |
| 2.2 材料与方法 | 第31-35页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第31页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第31-32页 |
| 2.2.3 实验方法 | 第32-35页 |
| 2.2.3.1 重组大肠杆菌的诱导表达 | 第32-33页 |
| 2.2.3.2 酶活测定方法及液相检测方法 | 第33-35页 |
| 2.3 实验结果与讨论 | 第35-47页 |
| 2.3.1 单因素实验优化培养基 | 第35-36页 |
| 2.3.1.1 不同碳源对发酵产酶的影响 | 第35页 |
| 2.3.1.2 不同氮源对发酵产酶的影响 | 第35-36页 |
| 2.3.2 Plackett-Burman二水平实验设计 | 第36-38页 |
| 2.3.3 最陡爬坡试验设计 | 第38页 |
| 2.3.4 响应面实验设计 | 第38-42页 |
| 2.3.5 最适诱导条件的确定 | 第42-47页 |
| 2.3.5.1 诱导时机的选择 | 第42-44页 |
| 2.3.5.2 诱导温度的影响 | 第44-45页 |
| 2.3.5.3 诱导剂浓度的影响 | 第45-46页 |
| 2.3.5.4 诱导时间的选择 | 第46-47页 |
| 2.4 本章小结 | 第47-49页 |
| 第三章 辅酶再生酶醇脱氢酶的选择及发酵工艺研究 | 第49-56页 |
| 3.1 引言 | 第49页 |
| 3.2 材料与方法 | 第49-51页 |
| 3.2.1 实验仪器 | 第49页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第49-50页 |
| 3.2.3 实验方法 | 第50-51页 |
| 3.2.3.1 重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)/pET-28a(+)-TbADH的摇瓶培养与发酵产酶 | 第50页 |
| 3.2.3.2 醇脱氢酶TbADH的活力测定 | 第50-51页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第51-55页 |
| 3.3.1 醇脱氢酶的选择 | 第51-52页 |
| 3.3.2 优化后培养基培养TbADH产酶效果验证 | 第52页 |
| 3.3.3 醇脱氢酶诱导条件的优化 | 第52-55页 |
| 3.3.3.1 诱导时机对TbADH酶活的影响 | 第52-53页 |
| 3.3.3.2 诱导温度对醇脱氢酶TbADH活力的影响 | 第53-54页 |
| 3.3.3.3 诱导剂浓度对醇脱氢酶TbADH活力的影响 | 第54页 |
| 3.3.3.4 诱导时间对醇脱氢酶TbADH活力的影响 | 第54-55页 |
| 3.4 本章小结 | 第55-56页 |
| 第四章 双菌双酶反应制备L-草铵膦的研究 | 第56-73页 |
| 4.1 引言 | 第56页 |
| 4.2 材料与方法 | 第56-61页 |
| 4.2.1 实验仪器 | 第56-57页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第57页 |
| 4.2.3 实验方法 | 第57-61页 |
| 4.2.3.1 谷氨酸脱氢酶PpGluDH的蛋白纯化 | 第57-58页 |
| 4.2.3.2 谷氨酸脱氢酶PpGluDH的酶学性质研究 | 第58-59页 |
| 4.2.3.3 底物2-羰基-4-(羟基甲基膦酰基)丁酸(PPO)的分析方法 | 第59页 |
| 4.2.3.4 双酶催化反应体系的研究 | 第59-61页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第61-71页 |
| 4.3.1 谷氨酸脱氢酶PpGluDH的纯化 | 第61页 |
| 4.3.2 谷氨酸脱氢酶PpGluDH的酶学性质研究 | 第61-66页 |
| 4.3.2.1 反应温度对PpGluDH活力的影响和温度稳定性 | 第61-63页 |
| 4.3.2.2 反应pH对PpGluDH酶活的影响和pH稳定性 | 第63-64页 |
| 4.3.2.3 金属离子及EDTA对PpGluDH酶活的影响 | 第64页 |
| 4.3.2.4 底物浓度对PpGluDH酶活力的影响 | 第64-65页 |
| 4.3.2.5 NH_4~+浓度对PpGluDH酶活力的影响 | 第65页 |
| 4.3.2.6 酶的动力学参数 | 第65-66页 |
| 4.3.3 双菌双酶反应体系优化 | 第66-71页 |
| 4.3.3.1 反应温度对催化效率的影响 | 第66-67页 |
| 4.3.3.2 反应pH对催化效率的影响 | 第67页 |
| 4.3.3.3 酶量对催化效率的影响 | 第67-68页 |
| 4.3.3.4 双酶比例对催化效率的影响 | 第68-69页 |
| 4.3.3.5 NH_4~+浓度对催化效率的影响 | 第69-70页 |
| 4.3.3.6 NADP~+浓度对催化效率的影响 | 第70页 |
| 4.3.3.7 异丙醇对催化效率的影响 | 第70-71页 |
| 4.4 本章小结 | 第71-73页 |
| 第五章 氨基酸脱氢酶库的构建及其应用初探 | 第73-88页 |
| 5.1 引言 | 第73页 |
| 5.2 材料与方法 | 第73-79页 |
| 5.2.1 实验仪器 | 第73页 |
| 5.2.2 实验试剂 | 第73页 |
| 5.2.3 菌种与质粒 | 第73页 |
| 5.2.4 培养基和试剂配制 | 第73-74页 |
| 5.2.5 实验方法 | 第74-79页 |
| 5.2.5.1 AADH目的基因的获取 | 第74-77页 |
| 5.2.5.2 表达载体的构建 | 第77页 |
| 5.2.5.3 转化 | 第77页 |
| 5.2.5.4 重组质粒的验证 | 第77页 |
| 5.2.5.5 目的基因的全合成 | 第77页 |
| 5.2.5.6 重组氨基酸脱氢酶的诱导表达 | 第77-78页 |
| 5.2.5.7 SDS-PAGE蛋白质电泳 | 第78页 |
| 5.2.5.8 分析方法的建立 | 第78-79页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第79-86页 |
| 5.3.1 氨基酸脱氢酶AADH的基因组挖掘 | 第79-80页 |
| 5.3.2 氨基酸脱氢酶AADH的基因克隆 | 第80-82页 |
| 5.3.3 氨基酸脱氢酶AADH的诱导表达 | 第82-84页 |
| 5.3.4 L-氨基酸产物的检测及标准曲线的绘制 | 第84-85页 |
| 5.3.5 氨基酸脱氢酶催化合成L-氨基酸的研究 | 第85-86页 |
| 5.4 本章小结 | 第86-88页 |
| 第六章 结论与展望 | 第88-90页 |
| 6.1 结论 | 第88-89页 |
| 6.2 展望 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-96页 |
| 附录Ⅰ 主要实验试剂 | 第96-97页 |
| 附录Ⅱ 主要实验仪器设备 | 第97-98页 |
| 附录Ⅲ 针对大肠表达系统进行密码子优化后的TbADH基因 | 第98-99页 |
| 作者简介 | 第99页 |
