| 摘要 | 第9-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 第一章 综述 | 第15-31页 |
| 1.1 茉莉的研究概况 | 第15-19页 |
| 1.1.1 茉莉的植物学特性 | 第15页 |
| 1.1.2 茉莉的病毒病害 | 第15-16页 |
| 1.1.3 侵染茉莉的主要病毒 | 第16-19页 |
| 1.2 香石竹潜引病毒属 | 第19-22页 |
| 1.2.1 香石竹潜隐病毒属病毒的分布及危害 | 第19页 |
| 1.2.2 香石竹潜隐病毒属病毒的基因组结构 | 第19-20页 |
| 1.2.3 香石竹潜隐病毒属病毒编码的蛋白及功能 | 第20-21页 |
| 1.2.4 香石竹潜隐病毒属病毒的寄主及传播途径 | 第21-22页 |
| 1.3 植物病毒侵染性克隆 | 第22-24页 |
| 1.3.1 植物侵染性克隆的类型 | 第22-23页 |
| 1.3.2 侵染性cDNA克隆的应用 | 第23-24页 |
| 1.4 植物病毒检测方法 | 第24-27页 |
| 1.4.1 分子生物学检测法 | 第24-26页 |
| 1.4.2 电子显微镜检测法 | 第26页 |
| 1.4.3 血清学方法 | 第26-27页 |
| 1.4.4 生物学检测法 | 第27页 |
| 1.5 原核表达和多克隆抗体的制备 | 第27-30页 |
| 1.5.1 原核表达系统 | 第28页 |
| 1.5.2 蛋白的纯化 | 第28-29页 |
| 1.5.3 多克隆抗体制备 | 第29-30页 |
| 1.6 研究目的和意义 | 第30-31页 |
| 第二章 材料与方法 | 第31-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第31页 |
| 2.1.1 植物材料、载体和菌种 | 第31页 |
| 2.1.2 生物试剂 | 第31页 |
| 2.1.3 常用缓冲液和培养基的配制 | 第31页 |
| 2.1.4 常用抗生素的配制 | 第31页 |
| 2.2 方法 | 第31-38页 |
| 2.2.1 植物总RNA的提取 | 第32页 |
| 2.2.2 引物设计 | 第32-33页 |
| 2.2.3 RT-PCR | 第33-34页 |
| 2.2.4 1.0%的琼脂糖凝胶电泳检测 | 第34页 |
| 2.2.5 DNA的克隆 | 第34-35页 |
| 2.2.6 感受态细胞的制备 | 第35页 |
| 2.2.7 连接产物的转化 | 第35-36页 |
| 2.2.8 菌落PCR鉴定 | 第36页 |
| 2.2.9 质粒提取 | 第36-37页 |
| 2.2.10 序列分析 | 第37-38页 |
| 第三章 田间调查 | 第38-42页 |
| 3.1 材料 | 第38页 |
| 3.2 方法 | 第38-39页 |
| 3.2.1 提取总RNA | 第38-39页 |
| 3.2.2 多重RT-PCR检测 | 第39页 |
| 3.3 结果 | 第39-41页 |
| 3.3.1 田间调查分析 | 第39-40页 |
| 3.3.2 RT-PCR检测结果 | 第40-41页 |
| 3.4 讨论 | 第41-42页 |
| 第四章 茉莉C病毒福建分离物(JaVC-FJ) cDNA侵染性克隆的构建 | 第42-52页 |
| 4.1 材料 | 第42页 |
| 4.2 构建JaVC-FJ cDNA全长克隆 | 第42-45页 |
| 4.2.1 JaVC-FJ全基因组的扩增策略 | 第42-43页 |
| 4.2.2 植物总RNA的提取及RT-PCR扩增 | 第43页 |
| 4.2.3 PCR产物琼脂糖凝胶电泳和回收 | 第43页 |
| 4.2.4 连接、重组质粒的转化 | 第43页 |
| 4.2.5 测序及序列分析 | 第43页 |
| 4.2.6 JaVC-FJ cDNA全长侵染性克隆构建策略 | 第43-44页 |
| 4.2.7 JaVC-FJ cDNA全长的克隆以及鉴定 | 第44页 |
| 4.2.8 JaVC-FJ cDNA侵染性克隆转化农杆菌以及侵染烟草 | 第44-45页 |
| 4.2.9 JaVC-FJ侵染性的RT-PCR检测 | 第45页 |
| 4.3 JaVC CP基因的烟草亚细胞定位 | 第45-46页 |
| 4.3.1 构建重组质粒 | 第45-46页 |
| 4.3.2 农杆菌转化与浸润接种 | 第46页 |
| 4.3.3 激光共聚焦扫描显微镜观察 | 第46页 |
| 4.4 结果与分析 | 第46-50页 |
| 4.4.1 JaVC-FJ3个片段的克隆及分析 | 第46-47页 |
| 4.4.2 JaVC-FJ全基因组序列拼接和鉴定 | 第47-48页 |
| 4.4.3 JaVC-FJ cDNA全长的侵染性鉴定 | 第48-49页 |
| 4.4.4 激光共聚焦扫描显微镜观察 | 第49-50页 |
| 4.5 讨论 | 第50-52页 |
| 第五章 JaVC CP基因九个省茉莉分离物的克隆和序列分析 | 第52-57页 |
| 5.1 材料 | 第52页 |
| 5.2 方法 | 第52-53页 |
| 5.2.1 九个省茉莉的总RNA提取 | 第52页 |
| 5.2.2 RT-PCR和产物的回收 | 第52页 |
| 5.2.3 连接、转化及鉴定 | 第52-53页 |
| 5.2.4 测序及序列分析 | 第53页 |
| 5.3 结果与分析 | 第53-55页 |
| 5.3.1 JaVC九个省分离物CP基因的克隆 | 第53页 |
| 5.3.2 序列分析 | 第53-55页 |
| 5.4 讨论 | 第55-57页 |
| 第六章 JaVC CP基因的原核表达及多克隆抗体的制备 | 第57-62页 |
| 6.1 材料 | 第57页 |
| 6.2 方法 | 第57-58页 |
| 6.2.1 原核表达载体的构建 | 第57页 |
| 6.2.2 CP的表达和可溶性鉴定 | 第57-58页 |
| 6.2.3 表达产物的纯化 | 第58页 |
| 6.2.4 CP抗体的制备 | 第58页 |
| 6.3 结果与分析 | 第58-61页 |
| 6.3.1 CP基因的克隆 | 第59页 |
| 6.3.2 利用原核表达系统表达融合蛋白 | 第59-60页 |
| 6.3.3 CP纯化和抗体的制备 | 第60-61页 |
| 6.4 讨论 | 第61-62页 |
| 第七章 总结与讨论 | 第62-64页 |
| 7.1 田间茉莉三种病毒的调查 | 第62页 |
| 7.2 JaVC福建分离物cDNA侵染性克隆的构建 | 第62页 |
| 7.3 CP基因序列分析 | 第62-63页 |
| 7.4 CP的原核表达和抗体的制备 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 附录A 本研究相关基因GenBank序列号 | 第70-71页 |
| 附录B 本实验常用缓冲液及培养基 | 第71-73页 |
| 附录C 本研究常用抗生素 | 第73-74页 |
| 附录D 本研究所用缩写词和中文对照 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
