| 致谢 | 第8-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 前言 | 第14-16页 |
| 材料与方法 | 第16-44页 |
| 1. 实验菌株和质粒 | 第16页 |
| 2. 培养基 | 第16-18页 |
| 2.1 YPD培养基 | 第16-17页 |
| 2.2 LB培养基 | 第17页 |
| 2.3 pet28a原核体系表达培养基 | 第17页 |
| 2.4 MD培养基 | 第17页 |
| 2.5 发酵表达培养基 | 第17-18页 |
| 3. 实验仪器和装置 | 第18页 |
| 4. 试剂盒、工具酶和化学试剂 | 第18-21页 |
| 4.1 试剂盒 | 第18页 |
| 4.2 工具酶 | 第18页 |
| 4.3 化学试剂 | 第18-21页 |
| 5. 引物设计 | 第21-23页 |
| 5.1 ANG糖化酶基因获得引物 | 第21页 |
| 5.2 ANG-SBD基因环化引物 | 第21-22页 |
| 5.3 重组质粒构建验证引物 | 第22页 |
| 5.4 ANG-SBD的SBD结构域区域被替代所用引物 | 第22-23页 |
| 6. 实验方法与步骤 | 第23-44页 |
| 6.1 黑曲霉糖化酶基因的SBD结构域的环化及SBD-pet28a重组载体的构建 | 第23-30页 |
| 6.2 黑曲霉糖化酶基因毕赤酵母表达载体ANG-SBD-pPIC9K的构建 | 第30-37页 |
| 6.3 六种环化基因替代ANG-SBD-pPIC9K载体的SBD结构域,获得六种重组毕赤酵母表达载体 | 第37-38页 |
| 6.4 pet28a重组菌株的表达实验 | 第38-41页 |
| 6.5 六种环化重组菌株和ANG-SBD-pPIC9K对照菌株表达实验 | 第41-44页 |
| 结果与讨论 | 第44-62页 |
| 1. 黑曲霉基因组SBD结构域的环化及六种目的基因的获得 | 第44-49页 |
| 1.1 CPred软件预测环状变换位点 | 第44-46页 |
| 1.2 糖化酶SBD的环化 | 第46-47页 |
| 1.3 SBD-pet28a重组载体的构建和鉴定 | 第47-49页 |
| 2. 构建ANG-SBD-pPIC9K毕赤酵母表达载体 | 第49-53页 |
| 2.1 重叠PCR获得糖化酶目的基因 | 第49-51页 |
| 2.2 In-fusion体系的连接 | 第51-52页 |
| 2.3 ANG-SBD-pPIC9K载体的鉴定 | 第52-53页 |
| 3. 环化突变基因代替黑曲霉糖化酶基因SBD结构域区域 | 第53-56页 |
| 4. pet28a重组菌株的表达实验结果 | 第56-58页 |
| 4.1 环状变换后不同的SBD片段的纯化 | 第56页 |
| 4.2 不同SBD片段对生淀粉结合性能的比较 | 第56-58页 |
| 5. ANGCP-pPIC9K六种重组菌株的表达结果 | 第58-62页 |
| 5.1 毕赤酵母菌株发酵条件优化 | 第58-59页 |
| 5.2 六株环化突变重组菌株和对照菌株的蛋白表达实验结果 | 第59-62页 |
| 全文总结 | 第62页 |
| 创新点 | 第62-63页 |
| 展望 | 第63-64页 |
| 文献综述 | 第64-79页 |
| 1. 淀粉酶研究进展 | 第64-67页 |
| 1.1 淀粉 | 第64页 |
| 1.2 淀粉酶 | 第64-67页 |
| 2. SBD研究进展 | 第67-78页 |
| 2.1 微生物淀粉结合结构域(Starch binding domain,SBD) | 第67-69页 |
| 2.2 分类 | 第69-74页 |
| 2.3 SBD的应用 | 第74-75页 |
| 2.4 蛋白质的环化 | 第75-78页 |
| 3. 本课题的研究背景和思路 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-89页 |
| 在读期间发表论文和申请专利 | 第89页 |
