| 摘要 | 第10-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 符号说明 | 第16-18页 |
| 第一章 前言 | 第18-33页 |
| 1 糖胺聚糖 | 第18-20页 |
| 1.1 糖胺聚糖概述 | 第18页 |
| 1.2 糖胺聚糖的结构与分布 | 第18-20页 |
| 2 硫酸软骨素 | 第20-25页 |
| 2.1 硫酸软骨素的结构 | 第20-21页 |
| 2.2 硫酸软骨素的应用 | 第21-24页 |
| 2.2.1 骨关节炎,软骨再生和抗炎活性 | 第22-23页 |
| 2.2.2 在组织再生和工程中的应用 | 第23-24页 |
| 2.2.3 参与癌症诊断和治疗 | 第24页 |
| 2.3 软骨素的生产 | 第24-25页 |
| 3 E.coli K4荚膜多糖及UDP-glucose 4位异构酶 | 第25-30页 |
| 3.1 细胞表面荚膜多糖 | 第25-27页 |
| 3.2 E.coli K4荚膜多糖的合成及相关酶的研究 | 第27-28页 |
| 3.3 UDP-glucose 4位异构酶的研究进展 | 第28-29页 |
| 3.4 UDP-glucose 4位异构酶活性检测 | 第29-30页 |
| 4 生物信息学研究 | 第30-32页 |
| 4.1 生物信息学概述 | 第30-31页 |
| 4.2 蛋白质模拟 | 第31页 |
| 4.3 分子对接 | 第31-32页 |
| 5 研究意义 | 第32-33页 |
| 第二章 KfoA的重组表达及活性验证 | 第33-48页 |
| 1 实验仪器材料及试剂 | 第33-36页 |
| 1.1 试剂 | 第33页 |
| 1.2 溶液 | 第33-35页 |
| 1.3 实验仪器 | 第35-36页 |
| 2 实验方法 | 第36-42页 |
| 2.1 基因组提取及引物设计 | 第36页 |
| 2.2 KfoA的克隆及表达菌株的构建 | 第36-38页 |
| 2.3 KfoA的表达与纯化 | 第38-41页 |
| 2.4 KfoA活性检测 | 第41-42页 |
| 3 结果 | 第42-45页 |
| 4 讨论 | 第45-48页 |
| 4.1 基因重组及表达菌株的构建 | 第45-46页 |
| 4.2 蛋白的表达及纯化 | 第46页 |
| 4.3 毛细管电泳检测KfoA活性 | 第46-48页 |
| 第三章 两种新型快速检测KfoA活性方法的建立 | 第48-58页 |
| 1 实验仪器材料及试剂 | 第48-50页 |
| 1.1 试剂及耗材 | 第48页 |
| 1.2 溶剂 | 第48-49页 |
| 1.3 实验仪器 | 第49-50页 |
| 2 实验方法 | 第50-53页 |
| 2.1 基于毛细管电泳的KfoA活性的在线检测法的建立 | 第50-52页 |
| 2.3 建立偶联KfoC快速检测KfoA活性的方法 | 第52-53页 |
| 3 实验结果 | 第53-55页 |
| 3.1 毛细管电泳在线检测法检测KfoA活性 | 第53-54页 |
| 3.2 偶联KfoC法快速检测KfoA活性 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-58页 |
| 第四章 KfoA底物选择性及其机制的研究 | 第58-75页 |
| 1 实验仪器材料及试剂 | 第58-60页 |
| 1.1 试剂 | 第58页 |
| 1.2 溶液 | 第58-59页 |
| 1.3 实验仪器 | 第59-60页 |
| 2 实验方法 | 第60-66页 |
| 2.1 GalE-E.coli活性检测及与KfoA对不同底物转化率的比较 | 第60-63页 |
| 2.2 KfoA氨基酸序列分析及相关酶的转化活性对比 | 第63-64页 |
| 2.3 KfoA及S301Y突变体的蛋白质模拟及分子对接 | 第64-66页 |
| 3 结果 | 第66-73页 |
| 3.1 GalE-E. coli与KfoA转化活性比较 | 第66-68页 |
| 3.2 KfoA与GalE-E. coli的酶促动力学常数 | 第68-70页 |
| 3.3 KfoA的氨基酸序列比对分析 | 第70-71页 |
| 3.4 KfoA及突变体蛋白转化率的比较 | 第71-72页 |
| 3.5 KfoA与KfoA (S301Y)蛋白模拟与分子对接分析 | 第72-73页 |
| 4 讨论 | 第73-75页 |
| 结论 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第83-84页 |
| 英文论文 | 第84-95页 |
| 附件 | 第95页 |
