刺糖多孢菌中两个脂肪酶基因的克隆和应用研究
| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-28页 |
| 1.1 引言 | 第13页 |
| 1.2 脂肪酶的来源 | 第13-14页 |
| 1.3 脂肪酶催化的反应类型 | 第14-16页 |
| 1.4 微生物脂肪酶的结构 | 第16-17页 |
| 1.5 微生物脂肪酶的催化机理 | 第17-19页 |
| 1.6 嗜热脂肪酶简介 | 第19-20页 |
| 1.7 脂肪酶活力测定的方法 | 第20-22页 |
| 1.8 脂肪酶应用 | 第22-25页 |
| 1.9 微生物脂肪酶与生物柴油 | 第25-27页 |
| 1.10 本课题主要研究内容和意义 | 第27-28页 |
| 第二章 脂肪酶基因的克隆和表达载体的构建 | 第28-44页 |
| 2.1 引言 | 第28-29页 |
| 2.2 材料与方法 | 第29-36页 |
| 2.2.1 供试菌株、载体及试剂 | 第29页 |
| 2.2.2 主要仪器 | 第29-30页 |
| 2.2.3 培养基与抗生素 | 第30页 |
| 2.2.4 引物与测序 | 第30-31页 |
| 2.2.5 常用溶液和缓冲液 | 第31页 |
| 2.2.6 刺糖多孢菌基因组DNA的提取 | 第31-32页 |
| 2.2.7 大肠杆菌质粒DNA的小量提取 | 第32-33页 |
| 2.2.8 脂肪酶基因的PCR扩增 | 第33-34页 |
| 2.2.9 表达载体的构建 | 第34页 |
| 2.2.10 E.coli细胞感受态的制备 | 第34-35页 |
| 2.2.11 大肠杆菌的转化及转化子的筛选 | 第35-36页 |
| 2.3 结果与分析 | 第36-42页 |
| 2.3.1 刺糖多孢菌的培养 | 第36页 |
| 2.3.2 脂肪酶基因的克隆及序列分析 | 第36-40页 |
| 2.3.3 表达载体的构建 | 第40-42页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第42-44页 |
| 第三章 重组菌蛋白的表达 | 第44-59页 |
| 3.1 引言 | 第44-45页 |
| 3.2 材料与方法 | 第45-49页 |
| 3.2.1 主要试剂与溶液 | 第45页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第45-46页 |
| 3.2.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第46页 |
| 3.2.4 蛋白的诱导表达 | 第46页 |
| 3.2.5 酶的纯化 | 第46-47页 |
| 3.2.6 蛋白含量的测定 | 第47-48页 |
| 3.2.7 pNPP法测定酶活 | 第48-49页 |
| 3.2.8 蛋白结构预测 | 第49页 |
| 3.3 结果与分析 | 第49-57页 |
| 3.3.1 蛋白表达 | 第50-51页 |
| 3.3.2 脂肪酶的纯化 | 第51页 |
| 3.3.3 蛋白的含量 | 第51-52页 |
| 3.3.4 脂肪酶的活力 | 第52-53页 |
| 3.3.5 蛋白结构 | 第53-57页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第57-59页 |
| 第四章 刺糖多孢菌脂肪酶的酶学性质研究 | 第59-68页 |
| 4.1 引言 | 第59页 |
| 4.2 材料与方法 | 第59-62页 |
| 4.2.1 主要试剂 | 第59-60页 |
| 4.2.2 主要仪器 | 第60页 |
| 4.2.3 缓冲液的配制 | 第60页 |
| 4.2.4 温度对脂肪酶活性的影响 | 第60-61页 |
| 4.2.5 pH对脂肪酶活性的影响 | 第61页 |
| 4.2.6 金属离子和抑制剂等对脂肪酶活性的影响 | 第61页 |
| 4.2.7 有机溶剂对脂肪酶活性的影响 | 第61页 |
| 4.2.8 底物的碳链长度对脂肪酶活性的影响 | 第61-62页 |
| 4.3 结果与分析 | 第62-67页 |
| 4.3.1 温度对脂肪酶活性的影响 | 第62-63页 |
| 4.3.2 pH对脂肪酶活性的影响 | 第63页 |
| 4.3.3 金属离子和抑制剂等对脂肪酶活性的影响 | 第63-65页 |
| 4.3.4 有机溶剂对脂肪酶活性的影响 | 第65-66页 |
| 4.3.5 酶对不同碳链长度底物的催化活性 | 第66-67页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第67-68页 |
| 第五章 脂肪酶催化合成生物柴油的初步研究 | 第68-72页 |
| 5.1 引言 | 第68页 |
| 5.2 材料与方法 | 第68-70页 |
| 5.2.1 主要试剂 | 第69页 |
| 5.2.2 主要仪器 | 第69页 |
| 5.2.3 脂肪酶催化合成生物柴油 | 第69页 |
| 5.2.4 生物柴油的气相色谱检测分析 | 第69-70页 |
| 5.3 结果与分析 | 第70-71页 |
| 5.3.1 生物柴油的合成 | 第70页 |
| 5.3.2 生物柴油气相色谱检测 | 第70-71页 |
| 5.4 小结讨论 | 第71-72页 |
| 第六章 结论与展望 | 第72-74页 |
| 6.1 主要结论 | 第72-73页 |
| 6.2 展望 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 攻读硕士学位期间撰写和发表的论文 | 第82-83页 |
