| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第11-32页 |
| 1.1 血液发育的概述 | 第11-17页 |
| 1.1.1 概述 | 第11页 |
| 1.1.2 造血的个体发生 | 第11-12页 |
| 1.1.3 血细胞发生的阶段 | 第12-14页 |
| 1.1.4. 血细胞发育成熟的形态变化规律 | 第14-15页 |
| 1.1.5.血细胞生成的调节 | 第15-17页 |
| 1.2 斑马鱼造血作用概述 | 第17-23页 |
| 1.2.1 概述 | 第17-18页 |
| 1.2.2 斑马鱼血细胞形态学和生理学 | 第18页 |
| 1.2.3 红细胞和红细胞生成 | 第18-19页 |
| 1.2.4 骨髓细胞和髓细胞生成 | 第19-20页 |
| 1.2.5 血小板和血栓生成及凝固 | 第20-21页 |
| 1.2.7 造血作用的转录调控 | 第21页 |
| 1.2.8 造血作用和细胞因子信号的体液调控 | 第21-23页 |
| 1.3 锌指蛋白基因家族 | 第23-26页 |
| 1.3.1 锌指基因家族概述 | 第23-24页 |
| 1.3.2 锌指蛋白基因的结构 | 第24-25页 |
| 1.3.3 锌指蛋白基因在血液发育过程中的功能 | 第25-26页 |
| 1.4 TRIM基因家族 | 第26-29页 |
| 1.4.1 TRIM家族概述 | 第26页 |
| 1.4.2 TRIM家族的结构特点 | 第26-27页 |
| 1.4.3 TRIM家族的进化 | 第27-29页 |
| 1.5 本文研究的意义 | 第29-32页 |
| 2 材料与方法 | 第32-52页 |
| 2.1 材料 | 第32-36页 |
| 2.1.1 酶类和试剂盒 | 第32页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第32页 |
| 2.1.3 缓冲液和培养基 | 第32-34页 |
| 2.1.4 其他试剂 | 第34-35页 |
| 2.1.5 主要实验仪器 | 第35页 |
| 2.1.6 生物信息学分析的主要软件与数据库 | 第35-36页 |
| 2.2 方法 | 第36-52页 |
| 2.2.1 常规PCR | 第36-37页 |
| 2.2.2 引物设计与合成 | 第37页 |
| 2.2.3 总RNA的抽提 | 第37-38页 |
| 2.2.4 反转录RT-PCR | 第38页 |
| 2.2.5 PCR产物的纯化回收 | 第38-39页 |
| 2.2.6 连接T载体 | 第39-40页 |
| 2.2.7 感受态细胞的制备 | 第40页 |
| 2.2.8 连接产物的转化(热休克法) | 第40-41页 |
| 2.2.9 重组克隆的筛选和鉴定 | 第41-42页 |
| 2.2.10 质粒酶切 | 第42页 |
| 2.2.11 测序 | 第42页 |
| 2.2.12 重组质粒的构建 | 第42-43页 |
| 2.2.13 SDS-PAGE | 第43-45页 |
| 2.2.14 Western blot免疫印迹分析 | 第45-46页 |
| 2.2.15 原核细胞的蛋白表达及纯化 | 第46-47页 |
| 2.2.16 多克隆抗体的制备 | 第47页 |
| 2.2.17 组织中总蛋白的提取 | 第47页 |
| 2.2.18 地高辛标记RNA探针的合成 | 第47-49页 |
| 2.2.19 斑马鱼整体胚胎原位杂交 | 第49-50页 |
| 2.2.20 斑马鱼morpholino | 第50-51页 |
| 2.2.21 Wright-Giemsa染色法 | 第51-52页 |
| 3 实验结果及其分析 | 第52-66页 |
| 3.1 斑马鱼loc558117基因生物信息学分析 | 第52-54页 |
| 3.2 loc558117在原核细胞中的表达及多克隆抗体的制备 | 第54-58页 |
| 3.2.1 pMD18-T-loc558117质粒的构建 | 第54-55页 |
| 3.2.2 pET-28a-loc558117质粒的构建 | 第55页 |
| 3.2.3 loc558117基因在原核细胞中的蛋白诱导表达及纯化 | 第55-57页 |
| 3.2.4 斑马鱼loc558117多克隆抗体制备 | 第57-58页 |
| 3.2.5 Western blot分析loc558117在斑马鱼发育各组织的表达 | 第58页 |
| 3.3 原位杂交分析loc558117基因在斑马鱼中的表达 | 第58-60页 |
| 3.3.1 PGEMT-EASY-loc558117质粒的构建 | 第58-59页 |
| 3.3.2 原位杂交分析loc558117在斑马鱼发育中的表达 | 第59-60页 |
| 3.4 利用morpholino oligos敲减技术研究loc558117的功能 | 第60-66页 |
| 3.4.1 morpholino沉默引起斑马鱼胚胎形态变化 | 第60-61页 |
| 3.4.2 RT-PCR分析morpholino沉默对血液发育标志基因影响 | 第61-62页 |
| 3.4.3 原位杂交分析hbbe3基因在斑马鱼胚胎发育过程中的表达 | 第62-63页 |
| 3.4.4 原位杂交分析GATA2基因在斑马鱼胚胎发育过程中的表达 | 第63-65页 |
| 3.4.5 morpholino注射斑马鱼对loc558117及NKX2.5表达的影响 | 第65-66页 |
| 4 讨论 | 第66-69页 |
| 5 其他工作——LRRC39基因研究 | 第69-72页 |
| 5.1 LRRC39基因背景介绍 | 第69-70页 |
| 5.2 亚细胞定位 | 第70-71页 |
| 5.3 蛋白水平的组织表达情况 | 第71页 |
| 5.4 对肿瘤抑癌基因的影响 | 第71-72页 |
| 结语 | 第72-75页 |
| 参考文献 | 第75-82页 |
| 附录1 | 第82-84页 |
| 附录2 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
