| 摘要 | 第12-14页 |
| ABSTRACT | 第14-16页 |
| 缩略词表 | 第17-18页 |
| 第一章 绪论 | 第18-36页 |
| 1.1 木质纤维素结构的研究进展 | 第18-25页 |
| 1.1.1 植物细胞壁的结构 | 第19-20页 |
| 1.1.2 木质纤维素的主要成分及其结构 | 第20-22页 |
| 1.1.3 纤维素的结构 | 第22-24页 |
| 1.1.4 纤维素对生物质转化效率的影响 | 第24-25页 |
| 1.2 纤维素酶系统的研究进展 | 第25-28页 |
| 1.2.1 降解纤维素的微生物 | 第25-26页 |
| 1.2.2 纤维素酶的种类与组合形式 | 第26-28页 |
| 1.3 纤维素酶相关的生物信息学研究进展 | 第28-34页 |
| 1.3.1 宏基因组与基因序列的快速增长 | 第28页 |
| 1.3.2 糖苷水解酶家族的分类 | 第28-31页 |
| 1.3.3 糖苷水解酶结构域的组合形式 | 第31-32页 |
| 1.3.4 纤维素酶催化功能的研究进展 | 第32-33页 |
| 1.3.5 基于结构生物信息学指导糖苷水解酶家族纤维素酶的理性设计 | 第33-34页 |
| 1.4 立题依据 | 第34-36页 |
| 第一章 GH12家族糖苷水解酶活性架构功能区的确定与关键氨基酸位点分析 | 第36-51页 |
| 2.1 材料与方法 | 第36-39页 |
| 2.1.1 生物信息数据库以及其在线分析网站 | 第36页 |
| 2.1.2 生物信息学软件 | 第36-37页 |
| 2.1.3 GH12家族糖苷水解酶数据的获取 | 第37页 |
| 2.1.4 GH12家族蛋白序列与空间架构分析 | 第37页 |
| 2.1.5 GH12家族糖苷水解酶活性架构序列谱的生成 | 第37-38页 |
| 2.1.6 活性架构序列谱的稳定性检验 | 第38-39页 |
| 2.2 结果与分析 | 第39-50页 |
| 2.2.1 GH12家族糖苷水解酶系统发育树 | 第39-40页 |
| 2.2.2 GH12家族糖苷水解酶活性架构功能区 | 第40页 |
| 2.2.3 GH12家族糖苷水解酶表面电势分析 | 第40-42页 |
| 2.2.4 糖苷水解酶GH12家族活性架构序列谱的生成 | 第42-44页 |
| 2.2.5 活性架构序列谱的可信度检验 | 第44-45页 |
| 2.2.6 酶活性架构关键氨基酸的分析 | 第45-49页 |
| 2.2.7 拟研究的关键氨基酸位点以及突变体 | 第49-50页 |
| 2.3 小结与讨论 | 第50-51页 |
| 第三章 GH12家族糖苷水解酶的异源表达与重组酶性质分析 | 第51-71页 |
| 3.1 材料与方法 | 第51-61页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第51-53页 |
| 3.1.2 培养基 | 第53-54页 |
| 3.1.3 主要试剂与仪器 | 第54页 |
| 3.1.4 常用分子生物学方法 | 第54-57页 |
| 3.1.5 重组蛋白的表达 | 第57-59页 |
| 3.1.6 SDS-PAGE和Western blotting电泳检测重组蛋白的表达 | 第59页 |
| 3.1.7 重组蛋白的分离纯化 | 第59页 |
| 3.1.8 纤维素酶性质测定 | 第59-61页 |
| 3.2 结果与分析 | 第61-69页 |
| 3.2.1 GH12家族中egl3与egla基因的克降 | 第61-62页 |
| 3.2.2 重组质粒的构建 | 第62-63页 |
| 3.2.3 重组蛋白的表达 | 第63-65页 |
| 3.2.4 重组蛋白的纯化及比较 | 第65-67页 |
| 3.2.5 重组蛋白的CD光谱分析 | 第67页 |
| 3.2.6 pH与温度对酶活力的影响 | 第67-69页 |
| 3.2.7 内切纤维素酶活力测定 | 第69页 |
| 3.3 小结与讨论 | 第69-71页 |
| 第四章 GH12家族糖苷水解晦关键氨基酸的丙氨酸筛选与性质分析 | 第71-87页 |
| 4.1 材料与方法 | 第71-78页 |
| 4.1.1 菌株与质粒 | 第71-72页 |
| 4.1.2 培养基 | 第72页 |
| 4.1.3 主要试剂与仪器 | 第72页 |
| 4.1.4 常用分子生物学方法 | 第72-75页 |
| 4.1.5 重组蛋白在毕赤酵母GS115中的表达 | 第75-76页 |
| 4.1.6 SDS-PAGE电泳检测重组蛋白的表达 | 第76页 |
| 4.1.7 重组蛋白的分离纯化 | 第76页 |
| 4.1.8 再生纤维素(RAC)的制备 | 第76-77页 |
| 4.1.9 重组蛋白的性质测定 | 第77页 |
| 4.1.10 纤维素酶的产物谱分析 | 第77-78页 |
| 4.2 结果与分析 | 第78-86页 |
| 4.2.1 基因egl3关键氨基酸的定点突变 | 第78-79页 |
| 4.2.2 重组质粒的基因验证 | 第79页 |
| 4.2.3 突变体蛋白的表达纯化以及活性电泳 | 第79-80页 |
| 4.2.4 突变体蛋白对不同底物催化性质测定 | 第80-82页 |
| 4.2.5 突变体蛋白的二级结构分析 | 第82页 |
| 4.2.6 纤维素寡糖水解产物的分析 | 第82-84页 |
| 4.2.7 GH12家族糖苷水解酶活性架构识别不同底物共同的结构基础 | 第84-86页 |
| 4.3 小结与讨论 | 第86-87页 |
| 第五章 GH12家族糖苷水解酶活性架构中决定多功能关键氨基酸的功能分析 | 第87-101页 |
| 5.1 材料与方法 | 第87-91页 |
| 5.1.1 菌株与质粒 | 第87-88页 |
| 5.1.2 培养基 | 第88页 |
| 5.1.3 主要试剂与仪器 | 第88页 |
| 5.1.4 常用分子生物学方法 | 第88-90页 |
| 5.1.5 重组蛋白在毕赤酵母GS115中的表达 | 第90页 |
| 5.1.6 SDS-PAGE变性电泳检测重组蛋白的表达 | 第90页 |
| 5.1.7 重组蛋白的分离纯化 | 第90页 |
| 5.1.8 重组蛋白生化性质测定 | 第90-91页 |
| 5.2 结果与分析 | 第91-99页 |
| 5.2.1 突变体蛋白的表达以及活性电泳检测 | 第91-92页 |
| 5.2.2 活性架构中关键氨基酸N20的功能分析 | 第92-96页 |
| 5.2.3 活性架构中关键氨基酸Y60的功能分析 | 第96-97页 |
| 5.2.4 活性架构中关键氨基酸D99的功能分析 | 第97-99页 |
| 5.3 小结与讨论 | 第99-101页 |
| 全文总结与展望 | 第101-103页 |
| 参考文献 | 第103-108页 |
| 致谢 | 第108-110页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第110-111页 |
| 学位论文评阋及答辩情况表 | 第111页 |
