| 摘要 | 第4-8页 |
| ABSTRACT | 第8-13页 |
| 1 文献综述 | 第24-36页 |
| 1.1 引言 | 第24页 |
| 1.2 低温对植物根系伤害的类型 | 第24-25页 |
| 1.3 低温对植株根系生长的影响 | 第25-26页 |
| 1.4 低温胁迫对植株根系的生理生化影响 | 第26-31页 |
| 1.4.1 低温胁迫对根系活力的影响 | 第26页 |
| 1.4.2 低温胁迫对根系生物膜的影响 | 第26-27页 |
| 1.4.3 低温胁迫下根系细胞内物质的变化 | 第27-31页 |
| 1.4.3.1 丙二醛(MDA)的变化 | 第27-28页 |
| 1.4.3.2 糖含量的变化 | 第28页 |
| 1.4.3.3 氨基酸的变化 | 第28-29页 |
| 1.4.3.4 蛋白质的变化 | 第29页 |
| 1.4.3.5 酶系统的影响 | 第29-30页 |
| 1.4.3.6 蛋白质组学的影响 | 第30-31页 |
| 1.5 低温下根系分子生物学方面的影响 | 第31-32页 |
| 1.6 α-tubulin基因 | 第32-33页 |
| 1.7 研究的目的和意义 | 第33-35页 |
| 1.8 技术路线 | 第35-36页 |
| 2 低温胁迫对甘蔗幼苗根系生长代谢的影响 | 第36-56页 |
| 2.1 材料与方法 | 第37-40页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第37页 |
| 2.1.2 种植及处理 | 第37-38页 |
| 2.1.3 测定项目与方法 | 第38-39页 |
| 2.1.3.1 甘蔗幼苗形态观察 | 第38页 |
| 2.1.3.2 根长和根体积的测定 | 第38页 |
| 2.1.3.3 生物量的测定 | 第38页 |
| 2.1.3.4 透射电镜样品的制备 | 第38-39页 |
| 2.1.4 低温胁迫对甘蔗幼苗根系生理生化特性的影响 | 第39-40页 |
| 2.1.4.1 可溶性蛋白质和不可溶性蛋白质含量的测定 | 第39页 |
| 2.1.4.2 可溶性糖和不可溶性糖含量的测定 | 第39页 |
| 2.1.4.3 氨基酸含量的测定 | 第39页 |
| 2.1.4.4 蛋白质水解酶活性的测定 | 第39-40页 |
| 2.1.5 数据分析 | 第40页 |
| 2.2 结果与分析 | 第40-52页 |
| 2.2.1 低温胁迫对甘蔗幼苗根系生长和亚显微结构的影响 | 第40-46页 |
| 2.2.1.1 低温胁迫对甘蔗形态的影响 | 第40-41页 |
| 2.2.1.2 低温胁迫对甘蔗根长和根体积的影响 | 第41页 |
| 2.2.1.3 低温胁迫对甘蔗生物量的影响 | 第41-43页 |
| 2.2.1.4 低温胁迫对甘蔗根系亚显微结构的影响 | 第43-44页 |
| 2.2.1.5 低温胁迫对甘蔗根系线粒体亚显微结构的影响 | 第44-46页 |
| 2.2.2 低温胁迫对甘蔗幼苗根系生理生化特性的影响 | 第46-50页 |
| 2.2.2.1 对甘蔗根系可溶性蛋白质含量的影响 | 第46-47页 |
| 2.2.2.2 对甘蔗根系不可溶性蛋白质含量的影响 | 第47页 |
| 2.2.2.3 低温胁迫对甘蔗根系氨基酸含量的影响 | 第47-48页 |
| 2.2.2.4 对甘蔗根系可溶性糖含量的影响 | 第48-49页 |
| 2.2.2.5 对甘蔗根系非可溶性糖含量的影响 | 第49-50页 |
| 2.2.3 低温胁迫对甘蔗幼苗根系蛋白质水解酶活性的影响 | 第50-52页 |
| 2.2.3.1 对甘蔗根系肽链内切酶活性的影响 | 第50-51页 |
| 2.2.3.2 对甘蔗根系羧肽酶活性的影响 | 第51页 |
| 2.2.3.3 对甘蔗根系氨肽酶活性的影响 | 第51-52页 |
| 2.3 讨论 | 第52-55页 |
| 2.3.1 低温胁迫对甘蔗幼苗根系生长和亚显微结构的影响 | 第52-54页 |
| 2.3.2 低温胁迫对甘蔗幼苗根系生理生化特性的影响 | 第54-55页 |
| 2.4 小结 | 第55-56页 |
| 3 甘蔗α-tubulin基因的原核表达和纯化 | 第56-70页 |
| 3.1 材料与方法 | 第56-62页 |
| 3.1.1 菌液材料 | 第56页 |
| 3.1.2 试剂 | 第56页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第56-57页 |
| 3.1.4 培养基 | 第57页 |
| 3.1.5 原核表达载体pET30a(+)质粒获得 | 第57页 |
| 3.1.6 PCR扩增及目的片段的回收 | 第57页 |
| 3.1.7 双酶切 | 第57-58页 |
| 3.1.8 目的片段与表达载体的连接 | 第58页 |
| 3.1.9 制备大肠杆菌DH5a感受态细胞 | 第58页 |
| 3.1.10 转化大肠杆菌DH5a | 第58页 |
| 3.1.11 筛选阳性菌液和测序 | 第58-59页 |
| 3.1.12 提取和验证重组质粒 | 第59页 |
| 3.1.13 制作BL21感受态细胞 | 第59页 |
| 3.1.14 转重组质粒入大肠杆菌BL21 | 第59-60页 |
| 3.1.15 诱导目的蛋白的表达 | 第60页 |
| 3.1.16 目的蛋白质SDS-PAGE电泳检测 | 第60页 |
| 3.1.17 包涵体的确认 | 第60页 |
| 3.1.18 目的蛋白质的纯化 | 第60-61页 |
| 3.1.19 透析和浓缩纯化蛋白质 | 第61页 |
| 3.1.20 纯化蛋白质的SDS-PAGE检测和质谱鉴定 | 第61-62页 |
| 3.2 结果与分析 | 第62-68页 |
| 3.2.1 原核表达载体的构建及验证 | 第62-64页 |
| 3.2.2 目的基因的诱导表达及SDS-PAGE电泳检测结果 | 第64-65页 |
| 3.2.3 目的蛋白质包涵体确认结果 | 第65-66页 |
| 3.2.4 目的蛋白质纯化结果 | 第66-67页 |
| 3.2.5 纯化蛋白质的透析和浓缩结果 | 第67-68页 |
| 3.3 讨论 | 第68-69页 |
| 3.4 小结 | 第69-70页 |
| 4 甘蔗α-微管蛋白的单克隆抗体的制备和检测 | 第70-77页 |
| 4.1 材料与方法 | 第70-72页 |
| 4.1.1 试验材料 | 第70页 |
| 4.1.2 试剂 | 第70-71页 |
| 4.1.3 仪器设备 | 第71页 |
| 4.1.4 小鼠免疫和血清的制备 | 第71页 |
| 4.1.5 阳性杂交瘤细胞的筛选和ELISA效价测定 | 第71页 |
| 4.1.6 血清抗体的Western Blot检测 | 第71页 |
| 4.1.7 单克隆抗体的大量生产和纯化 | 第71页 |
| 4.1.8 纯化抗体蛋白浓度、抗体效价和Western Blot检测 | 第71-72页 |
| 4.2 结果与分析 | 第72-75页 |
| 4.2.1 血清抗体效价分析结果 | 第72-73页 |
| 4.2.2 血清抗体Western Blot检测纯化蛋白质结果 | 第73页 |
| 4.2.3 血清抗体Western Blot检测甘蔗蛋白质结果 | 第73-74页 |
| 4.2.4 纯化抗体效价分析结果 | 第74-75页 |
| 4.2.5 单克隆抗体Western Blot验证 | 第75页 |
| 4.3 讨论 | 第75-76页 |
| 4.4 小结 | 第76-77页 |
| 5 低温胁迫对甘蔗幼苗根系α-tubulin基因的表达影响 | 第77-84页 |
| 5.1 材料与方法 | 第77-79页 |
| 5.1.1 试验材料 | 第77页 |
| 5.1.2 种植及处理 | 第77页 |
| 5.1.3 试剂 | 第77页 |
| 5.1.4 主要仪器 | 第77-78页 |
| 5.1.5 甘蔗总RNA提取及检测 | 第78页 |
| 5.1.6 cDNA的合成 | 第78页 |
| 5.1.7 荧光定量PCR引物的设计 | 第78页 |
| 5.1.8 荧光定量体系和PCR反应步骤 | 第78-79页 |
| 5.1.9 Western B10t验证α-tubulin蛋白质表达 | 第79页 |
| 5.1.10 数据分析 | 第79页 |
| 5.2 结果与分析 | 第79-82页 |
| 5.2.1 甘蔗根茎叶RNA及cDNA质量 | 第79-80页 |
| 5.2.2 α-tubulin基因在不同组织中的表达差异 | 第80页 |
| 5.2.3 α-tubulin基因在低温胁迫下的表达 | 第80-81页 |
| 5.2.4 α-tubulin蛋白质在低温胁迫下的表达差异 | 第81-82页 |
| 5.3 讨论 | 第82-83页 |
| 5.4 小结 | 第83-84页 |
| 6 甘蔗α-tubulin基因转化烟草的研究 | 第84-95页 |
| 6.1 材料与方法 | 第84-88页 |
| 6.1.1 植物材料 | 第84页 |
| 6.1.2 菌种和质粒 | 第84页 |
| 6.1.3 试剂 | 第84-85页 |
| 6.1.4 主要仪器设备 | 第85页 |
| 6.1.5 培养基 | 第85页 |
| 6.1.6 烟草表达载体引物的设计 | 第85页 |
| 6.1.7 α-tubulin基因ORF的扩增及目的片段的回收 | 第85-86页 |
| 6.1.8 pBI121质粒的提取 | 第86页 |
| 6.1.9 双酶切及目的片段的回收 | 第86页 |
| 6.1.10 EHA105农杆菌感受态细胞的制备 | 第86页 |
| 6.1.11 目的片段与载体的连接及转化EHA5α和阳性克隆的筛选 | 第86页 |
| 6.1.12 重组质粒的提取及酶切验证 | 第86-87页 |
| 6.1.13 烟草无菌苗制备及农杆菌介导叶盘法转化烟草 | 第87页 |
| 6.1.14 转基因烟草DNA的提取 | 第87页 |
| 6.1.15 转基因烟草的PCR检测 | 第87-88页 |
| 6.1.16 转基因烟草的GFP切片观察 | 第88页 |
| 6.2 结果与分析 | 第88-93页 |
| 6.2.1 目的基因表达载体的构建与重组质粒的酶切验证 | 第88-89页 |
| 6.2.2 重组质粒转化农杆菌检测 | 第89-90页 |
| 6.2.3 转基因烟草的获得 | 第90-91页 |
| 6.2.4 烟草DNA提取 | 第91-92页 |
| 6.2.5 转基因烟草PCR检测 | 第92-93页 |
| 6.2.6 转基因烟草GFP切片验证结果 | 第93页 |
| 6.3 讨论 | 第93-94页 |
| 6.4 小结 | 第94-95页 |
| 7 转甘蔗α-tubulin基因的烟草功能研究 | 第95-118页 |
| 7.1 材料与方法 | 第95-98页 |
| 7.1.1 试验材料 | 第95页 |
| 7.1.2 种植和处理 | 第95-96页 |
| 7.1.3 叶绿素含量的测定 | 第96页 |
| 7.1.4 光合作用测定方法 | 第96页 |
| 7.1.5 生理生化测定 | 第96-97页 |
| 7.1.6 α-tubulin基因的表达 | 第97页 |
| 7.1.7 数据分析 | 第97-98页 |
| 7.2 结果与分析 | 第98-112页 |
| 7.2.1 低温胁迫对烟草叶片叶绿素含量的影响 | 第98-99页 |
| 7.2.2 低温胁迫对烟草叶片光合作用的影响 | 第99-103页 |
| 7.2.2.1 对烟草叶片净光合速率的影响 | 第99-100页 |
| 7.2.2.2 对烟草叶片气孔导度的影响 | 第100-101页 |
| 7.2.2.3 对烟草叶片蒸腾速率的影响 | 第101-102页 |
| 7.2.2.4 对烟草叶片胞间二氧化碳浓度的影响 | 第102-103页 |
| 7.2.3 低温胁迫对烟草生理生化的影响 | 第103-107页 |
| 7.2.3.1 对烟草叶片可溶性蛋白质含量的影响 | 第103-104页 |
| 7.2.3.2 对烟草叶片可溶性糖含量的影响 | 第104-105页 |
| 7.2.3.3 对烟草叶片脯氨酸含量的影响 | 第105页 |
| 7.2.3.4 对烟草叶片SOD活性的影响 | 第105-106页 |
| 7.2.3.5 对烟草叶片POD活性的影响 | 第106-107页 |
| 7.2.3.6 对烟草叶片CAT活性的影响 | 第107页 |
| 7.2.4 α-tubulin基因在烟草中的表达 | 第107-112页 |
| 7.2.4.1 烟草RNA的提取结果 | 第107-108页 |
| 7.2.4.2 荧光定量qRT-PCR引物的筛选 | 第108-109页 |
| 7.2.4.3 α-tubulin基因在烟草不同组织中的表达差异 | 第109-110页 |
| 7.2.4.4 低温胁迫下α-tubulin基因在烟草叶片中的表达 | 第110-111页 |
| 7.2.4.5 烟草叶片蛋白质提取结果 | 第111页 |
| 7.2.4.6 低温胁迫下α-tubulin蛋白质在烟草叶片中的表达 | 第111-112页 |
| 7.3 讨论 | 第112-116页 |
| 7.3.1 低温胁迫对烟草光合作用的影响 | 第112-114页 |
| 7.3.2 低温胁迫对烟草生理生化的影响 | 第114-115页 |
| 7.3.3 低温胁迫对烟草α-tubulin基因表达的影响 | 第115-116页 |
| 7.4 小结 | 第116-118页 |
| 8 甘蔗α-tubulin基因转化甘蔗的研究 | 第118-128页 |
| 8.1 材料与方法 | 第118-122页 |
| 8.1.1 植物材料 | 第118页 |
| 8.1.2 菌种和质粒 | 第118-119页 |
| 8.1.3 试剂 | 第119页 |
| 8.1.4 主要仪器设备 | 第119页 |
| 8.1.5 培养基 | 第119-120页 |
| 8.1.6 甘蔗表达载体引物的设计 | 第120页 |
| 8.1.7 α-tubulin基因ORF的扩增及目的片段的回收 | 第120页 |
| 8.1.8 pCAMBIA3300质粒的提取 | 第120页 |
| 8.1.9 双酶切及目的片段的回收 | 第120页 |
| 8.1.10 目的片段与载体的连接及转化EHA5α和阳性克隆的筛选 | 第120页 |
| 8.1.11 重组质粒的提取和酶切验证 | 第120-121页 |
| 8.1.12 农杆菌介导法转化甘蔗 | 第121页 |
| 8.1.13 获得转基因甘蔗的PCR检测 | 第121页 |
| 8.1.14 转基因甘蔗DNA的提取 | 第121页 |
| 8.1.15 转基因甘蔗的PCR检测 | 第121-122页 |
| 8.2 结果与分析 | 第122-127页 |
| 8.2.1 载体构建和重组质粒双酶切验证 | 第122-123页 |
| 8.2.2 重组质粒转化农杆菌检测 | 第123页 |
| 8.2.3 转基因甘蔗的获得 | 第123-124页 |
| 8.2.4 除草剂(PPT)浓度筛选 | 第124-125页 |
| 8.2.5 用2.5 m/L PPT浓度筛选转基因甘蔗 | 第125页 |
| 8.2.6 不同炼苗时间对转基因甘蔗的影响 | 第125-126页 |
| 8.2.7 甘蔗DNA提取 | 第126页 |
| 8.2.8 转基因甘蔗PCR检测 | 第126-127页 |
| 8.3 讨论 | 第127页 |
| 8.4 小结 | 第127-128页 |
| 9 总结与展望 | 第128-131页 |
| 9.1 全文总结 | 第128-130页 |
| 9.2 本研究的创新点 | 第130页 |
| 9.3 问题与展望 | 第130-131页 |
| 参考文献 | 第131-148页 |
| 致谢 | 第148-150页 |
| 附录 | 第150-151页 |
