中文摘要 | 第4-6页 |
Abstract | 第6-7页 |
缩略词 | 第8-9页 |
文献综述一 | 第9-17页 |
文献综述二 | 第17-21页 |
第一章 Gn、Gc蛋白原核截短表达与抗原性分析 | 第21-49页 |
1 材料 | 第21-23页 |
1.1 菌株与质粒 | 第21页 |
1.2 主要试剂和材料 | 第21-22页 |
1.3 仪器 | 第22-23页 |
2 方法 | 第23-34页 |
2.1 抗原表位分析与引物设计 | 第23-24页 |
2.2 携带Gn1、Gn2、Gc1和Gc2片段原核载体构建 | 第24-28页 |
2.2.1 目的片段PCR与纯化 | 第24-25页 |
2.2.2 酶切与连接 | 第25-26页 |
2.2.3 重组质粒转化 | 第26-27页 |
2.2.4 菌液PCR鉴定 | 第27页 |
2.2.5 重组质粒筛选 | 第27-28页 |
2.3 重组蛋白的诱导表达与纯化 | 第28-30页 |
2.3.1 重组蛋白诱导表达与鉴定 | 第28-29页 |
2.3.2 重组蛋白的纯化与鉴定 | 第29-30页 |
2.4 高免血清制备 | 第30-31页 |
2.4.1 重组蛋白浓度测定 | 第30-31页 |
2.4.2 动物免疫与血清收集 | 第31页 |
2.5 原核表达蛋白抗原性分析 | 第31-34页 |
2.5.1 Western-blot分析 | 第31-32页 |
2.5.2 ELISA分析 | 第32-34页 |
3 结果 | 第34-47页 |
3.1 主要抗原区分析结果 | 第34页 |
3.2 目的基因PCR扩增结果 | 第34-35页 |
3.3 重组质粒的PCR鉴定结果 | 第35-36页 |
3.4 原核重组表达蛋白鉴定结果 | 第36-41页 |
3.4.1 重组蛋白表达形式鉴定结果 | 第36-37页 |
3.4.2 重组蛋白的纯化鉴定结果 | 第37-41页 |
3.5 原核表达的重组蛋白抗原性分析结果 | 第41-47页 |
3.5.1 Western-blot分析结果 | 第41-42页 |
3.5.2 ELISA分析结果 | 第42-47页 |
4 讨论 | 第47-49页 |
4.1 表达载体的选择 | 第47页 |
4.2 特异性片段的选择 | 第47-48页 |
4.3 表达体系的摸索 | 第48-49页 |
第二章 G(n+c)基因在昆虫杆状病毒中的表达及抗原性分析 | 第49-63页 |
1 材料 | 第49-51页 |
1.1 菌株、质粒和细胞 | 第49页 |
1.2 酶、抗体及试剂盒 | 第49-50页 |
1.3 仪器 | 第50-51页 |
2 方法 | 第51-58页 |
2.1 SF 9 细胞传代培养 | 第51页 |
2.2 引物设计 | 第51页 |
2.3 重组质粒pFastBac TMHT A-G(n+c) 的构建 | 第51-54页 |
2.3.1 目的基因的扩增与纯化 | 第51-53页 |
2.3.2 重组质粒酶切与连接 | 第53页 |
2.3.3 重组质粒pFastBacTMHT A-G(n+c) 的转化 | 第53-54页 |
2.3.4 菌液PCR鉴定 | 第54页 |
2.3.5 重组质粒pFastBacTMHT A-G(n+c) 的鉴定 | 第54页 |
2.4 穿梭质粒rBacmid-G(n+c)的构建与PCR鉴定 | 第54-57页 |
2.4.1 同源重组构建穿梭质粒rBacmid-G(n+c) | 第54-55页 |
2.4.2 穿梭质粒rBacmid-G(n+c)的PCR鉴定 | 第55-57页 |
2.5 重组杆状病毒rBac-G(n+c)的制备 | 第57-58页 |
2.6 Western-blot鉴定 | 第58页 |
3 结果 | 第58-61页 |
3.1 G(n+c)基因的PCR扩增结果 | 第58页 |
3.2 重组质粒pFastBac~(TM) HT A-G(n+c)构建结果 | 第58-59页 |
3.3 穿梭质粒r-Bacmid-G(n+c) 构建结果 | 第59-60页 |
3.4 重组杆状病毒rBac-G(n+c)的制备结果 | 第60-61页 |
3.5 Western-blot分析结果 | 第61页 |
4 讨论 | 第61-63页 |
全文结论 | 第63-64页 |
参考文献 | 第64-71页 |
附录二 各种培养基、溶液及试剂的配制 | 第71-75页 |