| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略语表 | 第7-11页 |
| 第1章 引言 | 第11-21页 |
| 1.1 溶菌酶的分类 | 第14-15页 |
| 1.2 溶菌酶的作用机制 | 第15-17页 |
| 1.3 溶菌酶的主要功能和应用现状 | 第17-18页 |
| 1.4 水生动物溶菌酶的研究进展 | 第18页 |
| 1.5 水产养殖上应用溶菌酶的前景 | 第18-19页 |
| 1.6 本论文的研究目的和意义 | 第19-21页 |
| 第2章 褶纹冠蚌i-型溶菌酶基因(LYZ3)的克隆和表达 | 第21-50页 |
| 1. 前言 | 第21页 |
| 2. 材料与方法 | 第21-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.2 菌株和质粒 | 第22页 |
| 2.3 主要试剂 | 第22页 |
| 2.4 主要仪器设备 | 第22-23页 |
| 2.5 实验方法 | 第23-35页 |
| 2.5.1 褶纹冠蚌总RNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.5.2 褶纹冠蚌SMART cDNA的合成 | 第24-25页 |
| 2.5.3 CpLYZ3基因中间片段的获得 | 第25-26页 |
| 2.5.4 CpLYZ3基因3'末端和5'末端的克隆 | 第26-27页 |
| 2.5.5 CpLYZ基因的生物信息学分析 | 第27-29页 |
| 2.5.6 Real-Time PCR分析CpLYZ3基因的表达特征 | 第29-30页 |
| 2.5.6.1 CpLYZ3基因在褶纹冠蚌不同组织中的表达 | 第29-30页 |
| 2.5.6.2 嗜水气单胞菌和肽聚糖刺激后CpLYZ3基因的表达 | 第30页 |
| 2.5.7 CpLYZ3基因的原核表达 | 第30-35页 |
| 2.5.7.1 重组质粒pET30-LYZ3的构建 | 第30-33页 |
| 2.5.7.2 pET30-LYZ3在大肠杆菌中的诱导表达 | 第33-34页 |
| 2.5.7.3 重组CpLYZ3蛋白的纯化 | 第34-35页 |
| 3. 实验结果 | 第35-47页 |
| 3.1 褶纹冠蚌中总RNA的提取 | 第35-36页 |
| 3.2 CpLYZ3基因的cDNA序列及推导的氨基酸序列 | 第36-38页 |
| 3.3 推导的CpLYZ氨基酸序列的同源性比较 | 第38-39页 |
| 3.4 LYZ基因的系统进化树 | 第39-42页 |
| 3.5 CpLYZ基因的定量表达 | 第42-45页 |
| 3.5.1 CpLYZ3基因的组织表达 | 第43页 |
| 3.5.2 嗜水气单胞菌、肽聚糖和PBS刺激后CpLYZ3基因的表达变化 | 第43-45页 |
| 3.6 CpLYZ3基因的原核表达及纯化 | 第45-47页 |
| 4. 讨论 | 第47-50页 |
| 第3章 三角帆蚌共生菌噬菌体溶菌酶基因鉴定、原核表达及重组蛋白特性 | 第50-71页 |
| 1 前言 | 第50页 |
| 2 实验方法 | 第50-55页 |
| 2.1 HcPLYZ基因的生物信息学分析 | 第50-51页 |
| 2.2 三角帆蚌体内共生菌噬菌体溶菌酶的检测 | 第51-52页 |
| 2.3 Real-Time PCR分析HcPLYZ基因的表达特征 | 第52页 |
| 2.4 HcPLYZ基因的原核表达 | 第52-55页 |
| 2.4.1 重组质粒PET30-PLYZ的构建 | 第52-53页 |
| 2.4.2 PET30-PLYZ在大肠杆菌中的诱导表达及重组HcPLYZ蛋白的纯化 | 第53-54页 |
| 2.4.3 重组蛋白浓度的测定 | 第54页 |
| 2.4.4 重组HcPLYZ蛋白相对活性的测定 | 第54-55页 |
| 3 结果 | 第55-68页 |
| 3.1 HcPLYZ基因推导的氨基酸序列 | 第55-56页 |
| 3.2 推导的HcPLYZ氨基酸序列的同源性比较 | 第56-58页 |
| 3.3 LYZ基因的系统进化树 | 第58-59页 |
| 3.4 三角帆蚌体内共生菌噬菌体溶菌酶的检测 | 第59-62页 |
| 3.4.1 三角帆蚌体内共生菌菌落生长情况 | 第59页 |
| 3.4.2 PCR产物的鉴定 | 第59-62页 |
| 3.5 CpLYZ基因的定量表达 | 第62-64页 |
| 3.5.1 HcPLYZ基因的组织表达 | 第62页 |
| 3.5.2 嗜水气单胞菌刺激后HcPLYZ基因的表达 | 第62-64页 |
| 3.6 HcPLYZ基因的原核表达及纯化 | 第64-66页 |
| 3.7 重组HcPLYZ蛋白浓度的测定 | 第66-67页 |
| 3.8 pH、温度对重组HcPLYZ相对酶活力的影响 | 第67-68页 |
| 4 讨论 | 第68-71页 |
| 第4章 结论与展望 | 第71-73页 |
| 1 结论 | 第71-72页 |
| 2 展望 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-80页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第80页 |
