| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-13页 |
| 缩略语 | 第13-14页 |
| 第一章 类胰岛素结合蛋白综述 | 第14-23页 |
| 引言 | 第14页 |
| 1 免疫球蛋白超家族(Ig superfamily) | 第14-15页 |
| ·免疫球蛋白超家族(Ig superfamily)组成 | 第14-15页 |
| ·免疫球蛋白超家族(Ig superfamily)结构 | 第15页 |
| ·免疫球蛋白超家族(Ig superfamily)功能 | 第15页 |
| 2 类胰岛素结合蛋白的研究现状 | 第15-22页 |
| ·进化分析 | 第15-16页 |
| ·脊椎动物中的类胰岛素结合蛋白的研究现状 | 第16-21页 |
| ·IGFBPs的结构 | 第17-20页 |
| ·IGFBPs的生物学功能 | 第20-21页 |
| ·非脊椎动物中的类胰岛素结合蛋白的研究现状 | 第21-22页 |
| 3 展望 | 第22-23页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第23-25页 |
| 1 研究目的和意义 | 第23页 |
| 2 研究内容 | 第23-24页 |
| 3 实验流程 | 第24-25页 |
| 第三章 生物信息学分析 | 第25-37页 |
| 1 序列与生物信息学工具 | 第25页 |
| ·序列 | 第25页 |
| ·生物信息学工具 | 第25页 |
| 2 方法 | 第25-26页 |
| 3 结果 | 第26-35页 |
| ·BmIBP基因的序列 | 第26-28页 |
| ·BmIBP蛋白二级结构预测 | 第28页 |
| ·BmIBP蛋白三级结构预测 | 第28-29页 |
| ·BmIBP蛋白疏水性分析 | 第29-30页 |
| ·BmIBP蛋白跨膜区预测分析 | 第30页 |
| ·BmIBP蛋白磷酸化位点预测 | 第30-31页 |
| ·BmIBP蛋白信号肽预测 | 第31-32页 |
| ·BmIBP蛋白功能位点预测 | 第32页 |
| ·BmIBP蛋白在细胞内定位的预测 | 第32-33页 |
| ·BmIBP的语义注释和编码蛋白功能预测 | 第33-34页 |
| ·BmIBP氨基酸序列的同源性分析 | 第34-35页 |
| 4 讨论 | 第35-37页 |
| 第四章 家蚕BmIBP基因的克隆 | 第37-44页 |
| 1 材料与试剂 | 第37页 |
| ·材料与设备 | 第37页 |
| ·试剂 | 第37页 |
| 2 方法 | 第37-41页 |
| ·重组表达质粒的构建策略 | 第37页 |
| ·质粒提取 | 第37页 |
| ·PCR扩增 | 第37-38页 |
| ·PCR产物与pET-28a(+)载体的双酶切 | 第38-39页 |
| ·酶切反应的纯化 | 第39页 |
| ·连接反应 | 第39页 |
| ·Ecoli.TG1感受态的制备 | 第39页 |
| ·连接产物的转化 | 第39页 |
| ·重组克隆的筛选与鉴定 | 第39-40页 |
| ·挑斑 | 第39-40页 |
| ·质粒的小量制备 | 第40页 |
| ·PCR鉴定 | 第40页 |
| ·双酶切鉴定 | 第40页 |
| ·BmIBP基因序列测定 | 第40-41页 |
| 3 结果 | 第41-43页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第41页 |
| ·重组克隆的鉴定 | 第41-42页 |
| ·序列测定 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43-44页 |
| 第五章 重组蛋白的表达、纯化 | 第44-49页 |
| 1 材料与试剂 | 第44-45页 |
| ·材料与设备 | 第44页 |
| ·试剂 | 第44-45页 |
| ·处理包涵体试剂 | 第44页 |
| ·Ni~(2+)柱亲和层析纯化用试剂 | 第44-45页 |
| 2 方法 | 第45-46页 |
| ·重组质粒转化大肠杆菌表达菌 | 第45页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第45页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第45-46页 |
| 3 结果 | 第46-48页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及其表达形式 | 第46-47页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-49页 |
| 第六章 多克隆抗体制备和鉴定 | 第49-57页 |
| 1 材料与试剂 | 第49-51页 |
| ·材料与设备 | 第49页 |
| ·试剂 | 第49页 |
| ·主要试剂配置 | 第49-51页 |
| ·Bradford检测用试剂 | 第49页 |
| ·抗体制备用试剂 | 第49-50页 |
| ·ELISA试剂 | 第50页 |
| ·抗体纯化用试剂 | 第50页 |
| ·Western blotting试剂 | 第50-51页 |
| 2 方法 | 第51-54页 |
| ·Bradford法定量 | 第51页 |
| ·抗原制备 | 第51页 |
| ·免疫动物 | 第51-52页 |
| ·多克隆抗血清制备 | 第52页 |
| ·抗体的效价测定(ELISA间接法) | 第52-53页 |
| ·抗体的纯化 | 第53页 |
| ·Western blotting检测抗体特异性 | 第53-54页 |
| 3 结果 | 第54-56页 |
| ·纯化蛋白定量 | 第54页 |
| ·抗体的效价测定 | 第54页 |
| ·多克隆抗体的纯化 | 第54-55页 |
| ·Western blotting检测 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-57页 |
| 第七章 BmIBP蛋白的表达分析 | 第57-68页 |
| 1 材料与试剂 | 第57-58页 |
| ·材料与设备 | 第57页 |
| ·试剂 | 第57页 |
| ·主要试剂配置 | 第57-58页 |
| ·蛋白提取裂解液 | 第57-58页 |
| ·Bradford检测用试剂 | 第58页 |
| ·SDS-PAGE用溶液 | 第58页 |
| ·Western blotting试剂 | 第58页 |
| 2 方法 | 第58-61页 |
| ·总RNA的提取及定量 | 第58页 |
| ·总RNA的提取 | 第58页 |
| ·各组织总RNA的定量 | 第58页 |
| ·逆转录成cDNA | 第58-59页 |
| ·荧光定量PCR | 第59-60页 |
| ·荧光定量PCR引物的设计 | 第59页 |
| ·荧光定量PCR反应体系 | 第59-60页 |
| ·荧光定量PCR反应程序 | 第60页 |
| ·荧光定量PCR数据分析 | 第60页 |
| ·总蛋白的提取及定量 | 第60-61页 |
| ·Western blotting检测BmIBP蛋白在家蚕各发育时期的分布 | 第61页 |
| ·Western blotting检测BmIBP蛋白在家蚕各组织的分布 | 第61页 |
| 3 结果 | 第61-66页 |
| ·家蚕发育过程中BmIBP mRNA表达量的分析 | 第61-63页 |
| ·家蚕发育过程中BmIBP蛋白表达量的变化 | 第63页 |
| ·家蚕五龄幼虫各组织中的BmIBP mRNA表达量分析 | 第63-66页 |
| ·家蚕五龄幼虫各组织中的BmIBP蛋白表达量的变化 | 第66页 |
| 4 讨论 | 第66-68页 |
| 第八章 亚细胞定位 | 第68-71页 |
| 1 材料与试剂 | 第68页 |
| ·材料 | 第68页 |
| ·试剂 | 第68页 |
| ·试剂的配制 | 第68页 |
| 2 方法 | 第68-69页 |
| 3 结果 | 第69-70页 |
| 4 讨论 | 第70-71页 |
| 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
