| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略语 | 第9-14页 |
| 第一章 Enhancer of split 基因研究进展 | 第14-19页 |
| 1 前言 | 第14页 |
| 2 果蝇E(sp1)-C 基因分类 | 第14页 |
| 3 果蝇E(sp1)-C 编码蛋白结构与功能 | 第14-16页 |
| 4 哺乳动物同源物主要功能 | 第16-17页 |
| 5 研究展望 | 第17-19页 |
| 第二章 实验设计方案 | 第19-21页 |
| 1 实验目的和意义 | 第19页 |
| 2 研究内容 | 第19-20页 |
| 3 实验流程图 | 第20-21页 |
| ·BmE(spl)-like 基因克隆表达、表达产物抗血清的制备、BmE(spl)-like 蛋白的细胞定位和 HisPull-down 分析 | 第20页 |
| ·BmE(spl)-like 基因在家蚕体内转录与表达的分析 | 第20-21页 |
| 第三章 生物信息学分析 | 第21-27页 |
| 1 生物信息学工具 | 第21页 |
| 2 分析流程及结果 | 第21-25页 |
| ·基因序列的比对 | 第21页 |
| ·家蚕BmE(spl)-like 基因序列分析 | 第21-22页 |
| ·家蚕BmE(spl)-like 基因的结构分析 | 第22页 |
| ·家蚕BmE(spl)-like 基因推测的氨基酸序列生物信息学分析 | 第22-23页 |
| ·家蚕BmE(spl)-like 基因推测的氨基酸序列同源性分析 | 第23-24页 |
| ·BmE(spl)-like 蛋白质特性及功能分析 | 第24页 |
| ·二级结构的预测 | 第24-25页 |
| ·三级级结构的预测 | 第25页 |
| 3 讨论 | 第25-27页 |
| 第四章 家蚕BmE(spl)-like 基因的克隆 | 第27-36页 |
| 1 材料与试剂 | 第27-29页 |
| ·材料与设备 | 第27页 |
| ·试剂 | 第27页 |
| ·试剂的配制 | 第27-29页 |
| 2 方法 | 第29-33页 |
| ·重组表达质粒的构建策略 | 第29页 |
| ·特异引物的设计与合成 | 第29页 |
| ·PCR 扩增 | 第29-30页 |
| ·PCR 产物与pET-28a 载体的双酶切 | 第30-31页 |
| ·酶切产物的回收纯化 | 第31页 |
| ·连接反应 | 第31页 |
| ·E.coli TG1、BL21（DE3）感受态细胞的制备 | 第31-32页 |
| ·连接产物的转化 | 第32页 |
| ·重组克隆的筛选与鉴定 | 第32页 |
| ·BmE(spl)-like 基因序列的测定 | 第32-33页 |
| 3 结果 | 第33-35页 |
| ·PCR 扩增目的基因 | 第33页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第33-34页 |
| ·重组质粒测序结果 | 第34-35页 |
| 4 讨论 | 第35-36页 |
| 第五章 重组蛋白的原核表达及纯化 | 第36-46页 |
| 1 材料与试剂 | 第36-39页 |
| ·材料与设备 | 第36页 |
| ·试剂 | 第36页 |
| ·试剂配制 | 第36-39页 |
| 2 方法 | 第39-42页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的表达 | 第39页 |
| ·SDS-PAGE 电泳分析 | 第39-40页 |
| ·包涵体的溶解 | 第40-41页 |
| ·融合蛋白的亲和层析纯化 | 第41页 |
| ·融合蛋白的FPLC 纯化 | 第41-42页 |
| ·融合蛋白分子量的质谱鉴定 | 第42页 |
| 3 结果 | 第42-44页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第42页 |
| ·融合蛋白的表达形式以及蛋白纯化 | 第42-43页 |
| ·FPLC 分离纯化 | 第43-44页 |
| ·融合蛋白的质谱分析 | 第44页 |
| 4 讨论 | 第44-46页 |
| 第六章 多克隆抗体制备及效价测定 | 第46-53页 |
| 1 试剂与材料 | 第46-48页 |
| ·实验动物 | 第46页 |
| ·抗体制备用试剂 | 第46页 |
| ·主要试剂配制 | 第46-48页 |
| ·Bradford 溶液 | 第46页 |
| ·ELISA 用溶液 | 第46-47页 |
| ·抗体纯化用试剂 | 第47页 |
| ·Western blotting 用溶液 | 第47-48页 |
| 2 方法 | 第48-50页 |
| ·抗体的制备 | 第48-49页 |
| ·抗原的制备 | 第48页 |
| ·免疫动物 | 第48页 |
| ·多克隆抗血清制备 | 第48-49页 |
| ·抗体的效价测定（ELISA 间接法） | 第49页 |
| ·抗体纯化 | 第49-50页 |
| ·融合蛋白的Western blotting 鉴定 | 第50页 |
| 3 结果 | 第50-52页 |
| ·抗体的效价测定结果 | 第50-51页 |
| ·抗体纯化 | 第51-52页 |
| ·融合蛋白的Western blotting 检测 | 第52页 |
| 4 讨论 | 第52-53页 |
| 第七章 BmE(spl)-like 表达分析 | 第53-64页 |
| 1 材料与试剂 | 第53-54页 |
| ·材料 | 第53页 |
| ·试剂 | 第53页 |
| ·试剂的配制 | 第53-54页 |
| ·蛋白提取裂解液（100 m L） | 第53-54页 |
| ·Bradford 检测用试剂 | 第54页 |
| ·SDS-PAGE 用溶液 | 第54页 |
| ·Western blotting 用溶液 | 第54页 |
| 2 方法 | 第54-57页 |
| ·总RNA 的提取 | 第54-55页 |
| ·引物设计 | 第55页 |
| ·荧光定量PCR | 第55-56页 |
| ·逆转录反应 | 第55-56页 |
| ·荧光定量PCR 反应 | 第56页 |
| ·荧光定量PCR 数据处理 | 第56-57页 |
| ·总蛋白的提取及定量 | 第57页 |
| ·Western blotting 检测 | 第57页 |
| 3 结果 | 第57-62页 |
| ·家蚕不同发育时期BmE(spl)-like 转录水平的差异 | 第57-59页 |
| ·家蚕不同发育时期BmE(spl)-like 蛋白表达量的变化 | 第59页 |
| ·五龄幼虫各组织中BmE(spl)-like 转录水平的差异 | 第59-61页 |
| ·五龄幼虫各组织中BmE(spl)-like 蛋白表达量的比较 | 第61-62页 |
| 4 讨论 | 第62-64页 |
| 第八章 亚细胞定位 | 第64-68页 |
| 1 试剂与材料 | 第64页 |
| ·材料 | 第64页 |
| ·试剂的配制 | 第64页 |
| 2 方法 | 第64-65页 |
| ·亚细胞定位 | 第64-65页 |
| 3 结果 | 第65-66页 |
| ·亚细胞定位 | 第65-66页 |
| 4 讨论 | 第66-68页 |
| 第九章 重组蛋白His Pull-down 分析 | 第68-71页 |
| 1 试剂和材料 | 第68-69页 |
| ·材料 | 第68页 |
| ·试剂 | 第68-69页 |
| 2 方法 | 第69页 |
| ·BmE(spl)-like 样品制备 | 第69页 |
| ·His Pull-down 分析 | 第69页 |
| ·胶体银染 | 第69页 |
| 3 结果 | 第69-70页 |
| 4. 讨论 | 第70-71页 |
| 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
