| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 主要縮略词简表 | 第9-10页 |
| 第1章 前言 | 第10-23页 |
| 1、肺癌概述 | 第10-13页 |
| 1.1 肺癌流行病学 | 第10页 |
| 1.2 肺癌分类与分期 | 第10-11页 |
| 1.3 肺癌的遗传易感性 | 第11-12页 |
| 1.4 肺癌的分子发病机制 | 第12-13页 |
| 2、miRNA概述 | 第13-19页 |
| 2.1 miRNA的命名 | 第13-14页 |
| 2.2 miRNA的成熟过程及作用机制 | 第14页 |
| 2.3 miRNA的定量检测 | 第14-15页 |
| 2.4 miRNA靶基因的预测 | 第15页 |
| 2.5 miRNA的功能分析 | 第15-16页 |
| 2.6 miRNA与人类癌症 | 第16-17页 |
| 2.7. miRNA与NSCLC | 第17-19页 |
| 3、EYA蛋白家族概述 | 第19-21页 |
| 3.1 EYA蛋白的结构与活性 | 第19-20页 |
| 3.2 EYA蛋白的细胞功能 | 第20页 |
| 3.3 EYA蛋白与人类癌症 | 第20-21页 |
| 4、本文立项依据 | 第21-23页 |
| 第2章 材料与方法 | 第23-36页 |
| 1、主要仪器设备 | 第23页 |
| 2、主要实验试剂 | 第23-26页 |
| 3、实验材料 | 第26-27页 |
| 4、实验内容与方法 | 第27-35页 |
| 4.1 细胞培养 | 第27-28页 |
| 4.2 Western Blot检测细胞中靶基因的表达水平 | 第28-30页 |
| 4.2.1 溶液配制 | 第28页 |
| 4.2.2 western blot实验流程 | 第28-30页 |
| 4.3 茎环引物(stem-loop primer)设计 | 第30页 |
| 4.4 总RNA提取 | 第30-31页 |
| 4.4.1 细胞总RNA提取 | 第30-31页 |
| 4.4.2 组织总RNA提取 | 第31页 |
| 4.5 qRT-PCR检测细胞和组织中miRNA的表达水平 | 第31页 |
| 4.6 细胞瞬时转染 | 第31页 |
| 4.7 双荧光素酶报告实验 | 第31-33页 |
| 4.7.1 主要试剂配制 | 第31-32页 |
| 4.7.2 质粒构建 | 第32-33页 |
| 4.7.3 转染级别质粒抽提 | 第33页 |
| 4.7.4 细胞培养与共转染 | 第33页 |
| 4.7.5 双荧光素酶报告系统检测 | 第33页 |
| 4.8 细胞恶性生物学表型的检测 | 第33-35页 |
| 4.8.1 Wound-Healing实验检测细胞迁移 | 第33-34页 |
| 4.8.2 基于PI染色的流式细胞周期分析 | 第34页 |
| 4.8.3 MTS法检测细胞增殖 | 第34页 |
| 4.8.4 Transwell实验检测细胞侵袭 | 第34-35页 |
| 5、数据分析 | 第35-36页 |
| 第3章 实验结果与分析 | 第36-50页 |
| 1、预测miR-30a在EYA2 mRNA 3’UTR是否有互补结合位点 | 第36页 |
| 2、Western Blot检测NSCLC细胞株中EYA2的蛋白水平 | 第36-37页 |
| 3、qRT-PCR检测miR-30a在肺腺癌中的表达水平 | 第37-41页 |
| 3.1 总RNA提取 | 第37-38页 |
| 3.2 A549细胞和14例肺腺癌组织中miR-30a表达水平的实时荧光定量检测 | 第38-41页 |
| 3.2.1 引物信息 | 第38-39页 |
| 3.2.2 qRT-PCR | 第39-40页 |
| 3.2.3 数据分析 | 第40-41页 |
| 4、miR-30a靶向作用于EYA2 mRNA3’UTR | 第41-43页 |
| 4.1 EYA2-3’UTR-wild type及-mutant序列的设计与合成 | 第41页 |
| 4.2 载体构建及测序 | 第41-43页 |
| 4.3 数据分析 | 第43页 |
| 5、miR-30a水平和EYA2表达的相关性分析 | 第43-45页 |
| 6、miR-30a mimics或EYA2 siRNAs能抑制A549细胞的迁移能力 | 第45-46页 |
| 7、miR-30a mimics对A549细胞的周期进程没有影响 | 第46页 |
| 8、miR-30a mimics对A549细胞的增殖没有影响 | 第46-48页 |
| 9、miR-30a mimics或EYA2 siRNAs能抑制A549细胞的侵袭能力 | 第48-49页 |
| 10、miR-124、miR-155、miR-140不能靶向调控A549细胞中EYA2的表达 | 第49-50页 |
| 第4章 讨论 | 第50-54页 |
| 参考文献 | 第54-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
