| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 目录 | 第10-13页 |
| 1 引言 | 第13-23页 |
| 1.1 肝癌 | 第13页 |
| 1.2 间充质干细胞 | 第13-17页 |
| 1.2.1 MSCs概况 | 第13-14页 |
| 1.2.2 MSCs成为肿瘤基因治疗的优势载体 | 第14-17页 |
| 1.3 NK4的抗肿瘤作用 | 第17-22页 |
| 1.3.1 NK4的结构特性 | 第17-18页 |
| 1.3.2 NK4抑制肿瘤血管生成 | 第18页 |
| 1.3.3 NK4基因靶向抗肿瘤作用 | 第18-20页 |
| 1.3.4 NK4的抗肿瘤机制 | 第20-22页 |
| 1.4 本研究的特色 | 第22-23页 |
| 2 实验材料 | 第23-27页 |
| 2.1 细胞株及细胞培养所用试剂 | 第23页 |
| 2.1.1 细胞株 | 第23页 |
| 2.1.2 培养基 | 第23页 |
| 2.2 毒株、载体与宿主菌 | 第23页 |
| 2.3 主要试剂及试剂盒 | 第23-24页 |
| 2.4 主要实验仪器及耗材 | 第24页 |
| 2.5 主要溶液的配制 | 第24-27页 |
| 2.5.1 核酸电泳缓冲液的配制 | 第25页 |
| 2.5.2 蛋白质电泳所用试剂及缓冲液的配制 | 第25页 |
| 2.5.3 细胞培养所用试剂配制 | 第25-27页 |
| 3 实验方法 | 第27-40页 |
| 3.1 MSCs的准备 | 第27-28页 |
| 3.1.1 MSCs的复苏和培养 | 第27页 |
| 3.1.2 MSCs的传代 | 第27-28页 |
| 3.1.3 MSCs的冻存 | 第28页 |
| 3.2 人高转移性肝癌细胞MHCC-97H和人胚肾细胞HEK293 | 第28-30页 |
| 3.2.1 MHCC-97H和HEK293的复苏 | 第28-29页 |
| 3.2.2 MHCC-97H和HEK293的培养 | 第29页 |
| 3.2.3 MHCC-97H和HEK293的冻存 | 第29-30页 |
| 3.3 MSCs迁移实验 | 第30页 |
| 3.4 重组腺病毒的获得 | 第30-36页 |
| 3.4.1 目的基因的获得 | 第31页 |
| 3.4.2 重组穿梭质粒pAdTrack-NK4的构建 | 第31页 |
| 3.4.3 连接产物转化E.coli DH5α感受态细胞 | 第31页 |
| 3.4.4 提取和鉴定重组穿梭质粒pAdTrack-NK4 | 第31-32页 |
| 3.4.5 重组腺病毒质粒pAdeasy-NK4的的获得 | 第32-33页 |
| 3.4.6 重组腺病毒的包装,收毒及扩增 | 第33-34页 |
| 3.4.7 PCR鉴定重组腺病毒 | 第34页 |
| 3.4.8 Western blot分析目的蛋白表达情况 | 第34-36页 |
| 3.5 rAd-NK4-MSCs对MHCC-97H增殖和转移的体外抑制及其机制 | 第36-39页 |
| 3.5.1 重组腺病毒rAd-NK4/GFP感染MSCs的最适MOI及蛋白表达时间的确定 | 第37页 |
| 3.5.2 共培养检测rAd-NK4-MSCs对MHCC-97H增殖的抑制作用 | 第37-38页 |
| 3.5.3 共培养检测rAd-NK4-MSCs对MHCC-97H转移的抑制作用 | 第38页 |
| 3.5.4 rAd-NK4-MSCs对MHCC-97H转移的抑制作用机制 | 第38-39页 |
| 3.6 rAd-NK4-MSCs条件培养基作用的HUVECs的细胞划痕实验 | 第39-40页 |
| 4. 实验结果 | 第40-54页 |
| 4.1 迁移实验 | 第40-41页 |
| 4.2 高滴度有活性的重组腺病毒rAd-NK4/GFP的获得 | 第41-47页 |
| 4.2.1 NK4基因的获得 | 第41-42页 |
| 4.2.2 重组穿梭质粒的构建与鉴定 | 第42-43页 |
| 4.2.3 在RecA~+E.coli BJ5183细胞中同源重组 | 第43-44页 |
| 4.2.4 将线性化的重组腺病毒质粒转染293细胞获得重组腺病毒 | 第44页 |
| 4.2.5 重组腺病毒rAd-NK4/GFP的鉴定 | 第44-45页 |
| 4.2.6 重组腺病毒rAd-NK4/GFP的扩增与滴度测定 | 第45-47页 |
| 4.3 MSCs介导的NK4对MHCC-97H细胞生长和转移的抑制作用 | 第47-52页 |
| 4.3.1 重组腺病毒rAd-NK4/GFP感染MSCs的最适MOI及蛋白表达时间的确定 | 第47-48页 |
| 4.3.2 MSCs介导的NK4对MHCC-97H细胞的体外增殖抑制效应 | 第48-50页 |
| 4.3.3 MSCs介导的NK4体外对MHCC-97H细胞转移的抑制作用及其机制 | 第50-52页 |
| 4.4 MSCs介导的NK4体外对人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)迁移的抑制作用 | 第52-54页 |
| 5 讨论 | 第54-57页 |
| 6 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-65页 |
| 附录A | 第65-66页 |
| 作者简历及攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第66-68页 |
| 学位论文数据集 | 第68页 |
