| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 前言 | 第8-24页 |
| 1.1 β-葡萄糖苷酶研究现状 | 第8-12页 |
| 1.1.1 β-葡萄糖苷酶的来源和性质 | 第8-9页 |
| 1.1.2 β-葡萄糖苷酶在食品工业中的应用进展 | 第9-10页 |
| 1.1.3 β-葡萄糖苷酶基因工程研究 | 第10-12页 |
| 1.2 异源蛋白的分泌表达系统 | 第12-22页 |
| 1.2.1 分泌表达系统的概述 | 第12页 |
| 1.2.2 大肠杆菌表达系统 | 第12-16页 |
| 1.2.3 枯草芽孢杆菌分泌表达系统 | 第16-22页 |
| 1.3 研究背景与研究内容 | 第22-24页 |
| 1.3.1 本实验组的研究背景 | 第22页 |
| 1.3.2 研究内容 | 第22-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-36页 |
| 2.1 材料 | 第24-28页 |
| 2.1.1 菌种与质粒 | 第24页 |
| 2.1.2 培养基 | 第24页 |
| 2.1.3 主要试剂盒和试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.4 主要溶液和缓冲液配制方法 | 第25-27页 |
| 2.1.5 主要仪器设备及其来源 | 第27页 |
| 2.1.6 DNA引物合成和DNA测序服务 | 第27-28页 |
| 2.2 方法 | 第28-36页 |
| 2.2.1 枯草芽孢杆菌基因组总DNA的提取 | 第28页 |
| 2.2.2 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第28-29页 |
| 2.2.3 枯草杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第29页 |
| 2.2.4 琼脂糖电泳胶回收DNA片断和质粒抽提 | 第29页 |
| 2.2.5 DNA磷酸化和连接反应 | 第29-30页 |
| 2.2.6 大肠杆菌重组子质粒的少量提取与纯化 | 第30页 |
| 2.2.7 重组载体的构建 | 第30-32页 |
| 2.2.8 重组菌的诱导表达 | 第32页 |
| 2.2.9 SDS-PAG聚丙烯酰氨凝胶电泳 | 第32-33页 |
| 2.2.10 蛋白质浓度的测定 | 第33-34页 |
| 2.2.11 对硝基苯酚法检测β-葡萄糖苷酶的活性 | 第34-35页 |
| 2.2.12 目的蛋白的分析 | 第35-36页 |
| 第三章 结果 | 第36-57页 |
| 3.1 分泌型重组载体的构建 | 第36-43页 |
| 3.1.1 重组载体构建流程 | 第36-37页 |
| 3.1.2 枯草芽孢杆菌基因组的提取 | 第37页 |
| 3.1.3 含目的片段的表达型质粒的构建 | 第37-40页 |
| 3.1.5 重组质粒pET-20b-Pamy-bglA的构建及酶切验证 | 第40-41页 |
| 3.1.6 重组质粒pHY-Pamy-blgA的构建及酶切验证 | 第41-43页 |
| 3.1.7 重组质粒pET-28a-thrombin-bglA的构建及酶切验证 | 第43页 |
| 3.2 不同启动子对Tm-BglA分泌表达情况的影响 | 第43-46页 |
| 3.3 Tm-BglA在不同载体上的分泌表达 | 第46-53页 |
| 3.3.1 Tm-BglA在载体pET-20b(+)和pET-28a(+)上的分泌表达 | 第47-50页 |
| 3.3.2 Tm-BglA在载体pET-20b(+)和pHY300PLK上的分泌表达 | 第50-53页 |
| 3.4 Tm-BglA在不同宿主菌内的分泌表达 | 第53-55页 |
| 3.5 高效分泌表达工程菌的分析 | 第55-57页 |
| 第四章 讨论 | 第57-60页 |
| 4.1 包涵体 | 第57-58页 |
| 4.2 信号肽 | 第58-60页 |
| 主要结论 | 第60-61页 |
| 存在的问题与展望 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-70页 |
| 在读期间发表的学术论文及研究成果 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
