| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 1 引言 | 第11-23页 |
| ·病原学 | 第11-13页 |
| ·病毒的特性 | 第11-12页 |
| ·病毒的基因组结构特点 | 第12-13页 |
| ·PRRS流行病学 | 第13-14页 |
| ·传染源 | 第13页 |
| ·传播途径 | 第13-14页 |
| ·PRRSV的持续性感染与继发感染 | 第14页 |
| ·PRRS的发病机理 | 第14-15页 |
| ·基因组的遗传变异研究 | 第15-17页 |
| ·非结构蛋白编码基因的遗传变异研究 | 第15-16页 |
| ·结构蛋白编码基因的遗传变异研究 | 第16-17页 |
| ·PRRS的诊断和检测技术 | 第17-18页 |
| ·PRRS疫苗研究进展 | 第18-22页 |
| ·灭活疫苗 | 第18-19页 |
| ·减毒活疫苗 | 第19页 |
| ·亚单位疫苗 | 第19-20页 |
| ·核酸疫苗 | 第20页 |
| ·重组疫苗 | 第20-21页 |
| ·活载体疫苗 | 第21页 |
| ·表位疫苗 | 第21-22页 |
| ·研究的目的与意义 | 第22页 |
| ·研究内容与技术路线 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-27页 |
| ·组织样本 | 第23页 |
| ·病毒分离用细胞、载体与菌株 | 第23页 |
| ·试验所需主要试剂 | 第23-24页 |
| ·主要仪器 | 第24-25页 |
| ·试验所需主要溶液及其配制 | 第25-26页 |
| ·RNA提取用溶液 | 第25页 |
| ·细胞培养用溶液 | 第25-26页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳所用溶液 | 第26页 |
| ·转化用溶液 | 第26页 |
| ·PRRSV毒株核苷酸序列 | 第26页 |
| ·分子生物学分析软件 | 第26-27页 |
| 3 方法 | 第27-34页 |
| ·引物设计 | 第27页 |
| ·组织材料中总RNA的提取 | 第27页 |
| ·反转录合成cDNA | 第27-28页 |
| ·PCR扩增PRRSV NSP2和ORF5 | 第28页 |
| ·PCR产物的凝胶回收纯化 | 第28-29页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第29-30页 |
| ·PCR产物与pMD~(TM)19-T载体的连接 | 第29页 |
| ·Top10感受态细胞的制备 | 第29页 |
| ·转化平板的制备 | 第29-30页 |
| ·连接产物转化Top10感受态细胞 | 第30页 |
| ·重组克隆载体的鉴定 | 第30-31页 |
| ·重组质粒的提取 | 第30-31页 |
| ·PCR方法筛选阳性克隆 | 第31页 |
| ·目的基因的序列测定及变异分析 | 第31页 |
| ·遗传变异分析 | 第31页 |
| ·推导编码氨基酸序列分析 | 第31-33页 |
| ·PRRSV的分离与细胞培养 | 第33-34页 |
| 4 结果与分析 | 第34-47页 |
| ·NSP2、ORF5基因的RT-PCR扩增 | 第34页 |
| ·NSP2和ORF5基因的克隆与测序 | 第34-35页 |
| ·NSP2基因的遗传变异分析 | 第35-39页 |
| ·Nsp2基因核苷酸序列和推导氨基酸序列的同源性分析 | 第35-37页 |
| ·依据Nsp2基因推导编码的氨基酸序列绘制遗传进化树 | 第37-39页 |
| ·Nsp2基因推导编码氨基酸序列的变异分析 | 第39页 |
| ·ORF5基因的遗传变异分析 | 第39-46页 |
| ·ORF5基因核苷酸序列和推导氨基酸序列的同源性分析 | 第39-43页 |
| ·依据ORF5基因推导氨基酸序列绘制遗传进化树 | 第43页 |
| ·GP5蛋白的氨基酸序列分析 | 第43-46页 |
| ·病毒分离 | 第46-47页 |
| 5 讨论 | 第47-50页 |
| ·NSP2基因的变异 | 第47-48页 |
| ·ORF5基因的变异 | 第48-49页 |
| ·细胞分离 | 第49-50页 |
| 6 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 附录 | 第58-66页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第66-67页 |
| 作者简介 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 附录 | 第69-74页 |
