| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 引言 | 第10-23页 |
| ·基因组印记及其发现 | 第10-11页 |
| ·印记基因的特征 | 第11页 |
| ·印记的建立、维持、抹除与重建 | 第11-12页 |
| ·印记基因可能的印记机制 | 第12-15页 |
| ·DNA 甲基化 | 第12-14页 |
| ·组蛋白修饰 | 第14页 |
| ·非编码RNA | 第14-15页 |
| ·基因组印记的生物学意义 | 第15-16页 |
| ·印记异常与遗传疾病 | 第15页 |
| ·基因组印记与动物体细胞核移植 | 第15-16页 |
| ·印记基因与家畜遗传育种 | 第16页 |
| ·主要研究方法 | 第16-21页 |
| ·RACE (Rapid amplification of cDNA ends) 技术 | 第16-18页 |
| ·PCR-SSCP 技术 | 第18-21页 |
| ·所研究的基因 | 第21-23页 |
| ·Dlk1-Dio3 印记区域研究现状 | 第21-22页 |
| ·Meg8 基因研究现状 | 第22页 |
| ·研究的内容及意义 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-37页 |
| ·实验材料 | 第23-26页 |
| ·牛组织样品 | 第23页 |
| ·主要试剂、试剂盒 | 第23页 |
| ·主要仪器和设备 | 第23-24页 |
| ·试剂配制 | 第24-25页 |
| ·生物信息学网站和分析软件 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-33页 |
| ·牛组织RNA 的提取 | 第26-27页 |
| ·反转录合成cDNA | 第27页 |
| ·引物设计 | 第27-28页 |
| ·扩增核心序列 | 第28页 |
| ·Meg8 基因3′末端序列的PCR 扩增(3′RACE) | 第28-29页 |
| ·Meg8 基因5′末端序列的PCR 扩增(5′RACE) | 第29-30页 |
| ·PCR 产物纯化与回收 | 第30-31页 |
| ·PMD18-T 载体连接反应 | 第31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第31-32页 |
| ·重组质粒检测及测序 | 第32页 |
| ·牛Meg8 基因全cDNA 序列的获得及序列分析预测 | 第32-33页 |
| ·基因组织特异性表达的RT-PCR 分析 | 第33页 |
| ·GAPDH 和目的基因的引物设计 | 第33页 |
| ·各个组织的RT-PCR 反应 | 第33页 |
| ·基因印记分析 | 第33-37页 |
| ·牛基因组DNA 的提取 | 第33-34页 |
| ·引物设计及PCR 扩增 | 第34页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染 | 第34-35页 |
| ·DNA 测序确定杂合子 | 第35页 |
| ·RT-PCR 直接测序法分析Meg8 基因的表达 | 第35-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-47页 |
| ·提取的总RNA 的质量 | 第37页 |
| ·牛Meg8 基因PCR 扩增结果 | 第37-39页 |
| ·牛Meg8 基因核心序列的PCR 扩增结果 | 第37-38页 |
| ·牛Meg8 基因3′末端序列PCR 扩增结果 | 第38页 |
| ·牛Meg8 基因5′末端序列PCR 扩增结果 | 第38-39页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第39-41页 |
| ·牛Meg8 基因核心片段的阳性克隆鉴定 | 第39-40页 |
| ·牛Meg8 基因3′末端序列阳性克隆鉴定 | 第40页 |
| ·牛Meg8 基因5′末端序列阳性克隆鉴定 | 第40-41页 |
| ·序列分析 | 第41-43页 |
| ·牛Meg8 基因核心序列、3′RACE 和5′RACE 扩增结果分析 | 第41页 |
| ·牛Meg8 基因的cDNA 全长序列分析 | 第41-42页 |
| ·牛Meg8 基因5′侧翼区的生物信息学分析及预测 | 第42-43页 |
| ·牛Meg8 基因的组织特异性表达分析 | 第43-44页 |
| ·牛GAPDH 基因的RT-PCR 扩增 | 第43页 |
| ·牛Meg8 基因的RT-PCR 扩增 | 第43-44页 |
| ·PCR-SSCP 检测杂合子 | 第44-46页 |
| ·基因组DNA 的提取 | 第44页 |
| ·PCR 扩增结果 | 第44-45页 |
| ·SSCP 分析检测结果与分析 | 第45页 |
| ·测序图谱 | 第45-46页 |
| ·直接测序法分析基因的印记状态 | 第46-47页 |
| 4 讨论 | 第47-49页 |
| ·牛Meg8 基因cDNA 全序列的获取及序列分析 | 第47页 |
| ·牛Meg8 基因的组织特异性表达分析 | 第47-48页 |
| ·牛Meg8 基因的印记状态分析 | 第48-49页 |
| 5 结论 | 第49-50页 |
| ·牛Meg8 基因cDNA 序列分析 | 第49页 |
| ·牛Meg8 基因的组织特异性表达分析 | 第49页 |
| ·牛Meg8 基因的印记状态分析 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-57页 |
| 在读期间发表论文 | 第57-58页 |
| 作者简介 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
