| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 1 引言 | 第8-24页 |
| ·FecB 基因概述 | 第8页 |
| ·FecB 基因提出及基因型的判定 | 第8页 |
| ·FecB 基因的生理效应 | 第8-9页 |
| ·对激素水平的影响 | 第9页 |
| ·对卵巢的影响 | 第9页 |
| ·对胎儿生长的影响 | 第9页 |
| ·FecB 基因定位 | 第9-10页 |
| ·候选基因定位法 | 第9页 |
| ·遗传标记定位法 | 第9-10页 |
| ·转基因动物的制备及其常用方法 | 第10-13页 |
| ·原核显微注射法 | 第11页 |
| ·反转录病毒载体法 | 第11-12页 |
| ·精子载体法 | 第12页 |
| ·胚胎干细胞介导法 | 第12-13页 |
| ·体细胞核移植法 | 第13页 |
| ·精子载体法原理及精子转染 | 第13-19页 |
| ·精子介导基因转移的基本原理 | 第13-14页 |
| ·精子介导基因转染的方法 | 第14-19页 |
| ·绿色荧光蛋白(GFP)的研究概况 | 第19-21页 |
| ·结构 | 第19页 |
| ·生化特性 | 第19-20页 |
| ·应用特点 | 第20页 |
| ·在转基因动物研究中的应用 | 第20-21页 |
| ·转基因动物鉴定 | 第21-23页 |
| ·PCR( polymerase chain reaction)技术 | 第21页 |
| ·Southern 印迹杂交检测 | 第21-22页 |
| ·DNA 拷贝数的检测 | 第22页 |
| ·整合位点的检测 | 第22-23页 |
| ·研究意义 | 第23-24页 |
| 2 试验研究 | 第24-38页 |
| ·试验材料 | 第24-26页 |
| ·材料 | 第24页 |
| ·试验试剂 | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24-25页 |
| ·溶液的配制 | 第25-26页 |
| ·试验方法 | 第26-36页 |
| ·总RNA 提取和质量控制 | 第26-28页 |
| ·RNA 的反转录 | 第28-29页 |
| ·PCR 引物设计 | 第29页 |
| ·PCR 扩增 | 第29-30页 |
| ·PCR 产物回收和产物克隆测序 | 第30-32页 |
| ·表达载体构建 | 第32-34页 |
| ·载体线性化标记 | 第34页 |
| ·精子的采集及处理 | 第34-35页 |
| ·免疫组化检查 | 第35-36页 |
| ·同期发情处理及人工授精 | 第36页 |
| ·后代耳组织DNA 的提取及PCR 检测 | 第36-38页 |
| ·耳组织DNA 的提取 | 第36页 |
| ·耳组织DNA 的PCR 检测 | 第36-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-45页 |
| ·样品总RNA 的质量 | 第38页 |
| ·FecB 基因 RT-PCR 扩增结果 | 第38-39页 |
| ·FecB 基因克隆测序结果 | 第39页 |
| ·PEGFP-n2 质粒的克隆回收及检测 | 第39-40页 |
| ·PEGFP-n2 质粒酶切鉴定及重组表达载体构建 | 第40-41页 |
| ·精子处理及检测 | 第41-43页 |
| ·精子洗涤处理对转染效率影响 | 第41-42页 |
| ·精子活力鉴定 | 第42页 |
| ·脂质体介导精子转染 | 第42页 |
| ·精子免疫组化检测 | 第42-43页 |
| ·同期发情处理及人工授精 | 第43页 |
| ·山羊基因组提取、PCR 检测 | 第43-45页 |
| 4 讨论 | 第45-47页 |
| ·总RNA 的提取 | 第45页 |
| ·脂质体介导的转染 | 第45页 |
| ·精子处理对转染效率的影响 | 第45-46页 |
| ·精子作为载体的可行性及存在问题 | 第46-47页 |
| 5 结论 | 第47-48页 |
| 6 有待进一步开展的工作 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第54-55页 |
| 作者简介 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |