| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-23页 |
| 1.1 γ-氨基丁酸概述 | 第11页 |
| 1.2 GABA 的化学结构及其理化性质 | 第11页 |
| 1.3 GABA 的生理功能及其应用 | 第11-14页 |
| 1.3.1 调节激素分泌 | 第12页 |
| 1.3.2 降低血压 | 第12页 |
| 1.3.3 控制哮喘 | 第12页 |
| 1.3.4 镇静安神增强记忆 | 第12-13页 |
| 1.3.5 治疗癫痫病 | 第13页 |
| 1.3.6 抗衰老 | 第13页 |
| 1.3.7 其他生理功能 | 第13-14页 |
| 1.4 γ-氨基丁酸在工业中的的应用 | 第14-15页 |
| 1.4.1 γ-氨基丁酸在食品工业中的应用 | 第14页 |
| 1.4.2 γ-氨基丁酸在饲料中的应用 | 第14-15页 |
| 1.4.3 γ-氨基丁酸在医药行业中的应用 | 第15页 |
| 1.5 γ-氨基丁酸在生物体内的代谢途径 | 第15-16页 |
| 1.6 γ-氨基丁酸的生产方法 | 第16-17页 |
| 1.6.1 化学合成法 | 第16-17页 |
| 1.6.2 植物富集法 | 第17页 |
| 1.6.3 微生物合成法 | 第17页 |
| 1.7 γ-氨基丁酸的测定方法 | 第17-18页 |
| 1.7.1 Berthelot 比色法 | 第17页 |
| 1.7.2 纸层析法 | 第17-18页 |
| 1.7.3 高效液相色谱法 | 第18页 |
| 1.7.4 毛细管电泳-电化学法 | 第18页 |
| 1.7.5 其它方法 | 第18页 |
| 1.8 微生物谷氨酸脱羧酶 | 第18-20页 |
| 1.8.1 微生物法生产γ-氨基丁酸 | 第18-19页 |
| 1.8.2 谷氨酸脱羧酶酶学性质 | 第19页 |
| 1.8.3 谷氨酸脱羧酶基因的克隆表达与定点突变 | 第19-20页 |
| 1.9 本课题的立题意义及主要研究内容 | 第20-23页 |
| 1.9.1 本课题的立题意义 | 第20页 |
| 1.9.2 本课题研究的主要内容 | 第20-21页 |
| 1.9.3 研究技术路线 | 第21-22页 |
| 1.9.4 缩略词表 | 第22-23页 |
| 第二章 谷氨酸脱羧酶基因的克隆、突变和表达 | 第23-34页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料 | 第23-26页 |
| 2.2.1 菌株与质粒 | 第23页 |
| 2.2.2 培养基 | 第23页 |
| 2.2.3 主要药品和试剂 | 第23-24页 |
| 2.2.4 分子生物学等相关试剂 | 第24页 |
| 2.2.5 主要实验仪器与设备 | 第24-26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-30页 |
| 2.3.1 大肠杆菌 gadB 基因片段获得 | 第26页 |
| 2.3.2 gadB 基因的缺失突变 | 第26页 |
| 2.3.3 谷氨酸脱羧酶基因表达载体的构建 | 第26-28页 |
| 2.3.4 大肠杆菌感受态细胞 DH5α以及 BL21（DE3）的制备 | 第28页 |
| 2.3.5 CaCl_2法转化大肠杆菌 | 第28-29页 |
| 2.3.6 阳性克隆的鉴定 | 第29页 |
| 2.3.7 重组 gadB 基因在 E.coli BL21（DE3）中的诱导表达与 SDS-PAGE 检测 | 第29-30页 |
| 2.4 结果与分析 | 第30-33页 |
| 2.4.1 目的片段谷氨酸脱酸酶基因 gadB 克隆与分析 | 第30页 |
| 2.4.2 谷氨酸脱羧酶基因表达载体的构建 | 第30-32页 |
| 2.4.3 核苷酸序列的测定 | 第32-33页 |
| 2.4.4 重组大肠杆菌诱导表达及其全细胞蛋白 SDS-PAGE 电泳分析 | 第33页 |
| 2.5 小结 | 第33-34页 |
| 第三章 GABA 的分析检测 | 第34-44页 |
| 3.1 引言 | 第34页 |
| 3.2 主要实验材料及仪器 | 第34页 |
| 3.3 分析检测方法 | 第34-36页 |
| 3.3.1 GAD 酶活测定 | 第34页 |
| 3.3.2 GABA 的 TLC 检测 | 第34-35页 |
| 3.3.3 比色法定量测定 GABA | 第35页 |
| 3.3.4 纸层析法定量测定 GABA | 第35-36页 |
| 3.3.5 GABA 的 HPLC 检测 | 第36页 |
| 3.4 结果与分析 | 第36-43页 |
| 3.4.1 TLC 定性检测 GABA | 第36-38页 |
| 3.4.2 比色法测定γ-氨基丁酸 | 第38-39页 |
| 3.4.3 纸层析法定量测定 GABA | 第39-40页 |
| 3.4.4 HPLC 测定 GABA | 第40-43页 |
| 3.5 小结 | 第43-44页 |
| 第四章 GAD 酶学性质 | 第44-51页 |
| 4.1 引言 | 第44页 |
| 4.2 实验材料 | 第44页 |
| 4.3 实验方法 | 第44-46页 |
| 4.3.1 GAD 酶学性质研究 | 第44-45页 |
| 4.3.2 种子液的培养 | 第45页 |
| 4.3.3 配罐及上罐 | 第45页 |
| 4.3.4 全细胞转化体系 | 第45-46页 |
| 4.4 结果与分析 | 第46-50页 |
| 4.4.1 温度对 GAD 酶活性质的影响 | 第46页 |
| 4.4.2 pH 对 GAD 酶活性质的影响 | 第46-47页 |
| 4.4.3 GAD 酶活热稳定性比较 | 第47-48页 |
| 4.4.4 GAD 酶活 pH 稳定性比较 | 第48页 |
| 4.4.5 发酵罐培养菌体及产酶研究 | 第48-49页 |
| 4.4.6 全细胞转化 | 第49-50页 |
| 4.5 小结 | 第50-51页 |
| 第五章 主要结论与展望 | 第51-53页 |
| 5.1 主要结论 | 第51-52页 |
| 5.2 展望 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 作者简介 | 第61-62页 |
| 导师评阅表 | 第62页 |
