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蒙古羊BMPR-IB、FSHβ基因克隆与表达及卵巢组织差异表达基因研究

 摘要第1-5页
Abstract第5-17页
1 引言第17-44页
   ·卵泡的发育模式及调控第17-26页
     ·卵泡发育的基本模式第17-19页
     ·下丘脑-垂体-卵巢轴在卵泡发育过程中的作用第19-23页
     ·生长因子对卵泡发育的调控第23-26页
   ·BMPR-IB 基因作为绵羊繁殖性状候选基因的研究进展第26-30页
     ·骨形态发生蛋白家族及BMPR-IB 基因的发现第26页
     ·BMPR-IB 基因的结构及染色体定位第26-28页
     ·BMPR-IB 基因对绵羊繁殖性能的影响第28-30页
   ·FSHβ基因的研究进展第30-32页
     ·FSHβ基因的结构第30-31页
     ·FSHβ基因与动物繁殖性状的关系第31-32页
   ·FSH 与 BMPs 信号传导通路及相互调控机制第32-34页
   ·本研究中所采用主要方法简介第34-42页
     ·实时荧光定量 PCR(Real-time Quantitative PCR,RQ-PCR)第34-37页
     ·抑制性消减杂交技术第37-41页
     ·电子克隆技术(Silicon Cloning)第41-42页
   ·本研究的目的、意义及主要研究内容第42-44页
2 实验一 蒙古羊BMPR-IB 和FSHβ基因的cDNA 克隆与序列分析第44-70页
   ·实验材料第44-46页
     ·实验动物及其组织第44页
     ·菌株和载体第44页
     ·主要试剂第44-45页
     ·主要仪器和设备第45页
     ·实验常用溶液和试剂的配制第45-46页
     ·主要分子生物学软件及相关网站第46页
   ·实验方法第46-52页
     ·卵巢组织总RNA 的提取第46-47页
     ·RT-PCR 反应过程第47-49页
     ·蒙古羊BMPR-IB 和FSHβ基因的克隆与测序第49-52页
   ·结果与分析第52-65页
     ·蒙古羊卵巢组织总RNA 的提取结果第52-53页
     ·蒙古羊BMPR-IB 和FSHβ基因的RT-PCR 扩增结果第53-54页
     ·扩增产物的克隆及重组质粒的筛选和鉴定第54-55页
     ·蒙古羊BMPR-IB 和FSHβ基因的测序结果及序列拼接第55-57页
     ·蒙古羊BMPR-IB 和FSHβ基因序列分析第57-61页
     ·蒙古羊BMPR-IB 和FSHβ蛋白结构分析第61-65页
   ·讨论第65-69页
     ·BMPR-IB 基因对绵羊繁殖性能的调控第65-67页
     ·FSHβ基因对绵羊繁殖性能的调控第67-69页
   ·小结第69-70页
3 实验二 蒙古羊BMPR-IB 和FSHβ基因在不同组织差异表达研究第70-86页
   ·实验材料第70-71页
     ·实验动物及其组织第70页
     ·主要仪器和设备第70页
     ·主要试剂第70-71页
   ·实验方法第71-73页
     ·卵巢组织总RNA 的提取第71页
     ·RQ-PCR 反应过程第71-72页
     ·标准品的制备及标准曲线制作第72-73页
     ·差异表达分析方法第73页
   ·结果与分析第73-81页
     ·蒙古羊各组织总RNA 的提取结果第73页
     ·蒙古羊β-Actin、BMPR-IB 和FSHβ基因的RQ-PCR 扩增结果分析第73-77页
     ·蒙古羊β-Actin、BMPR-IB 和FSHβ基因的RQ-PCR 定量结果分析第77-81页
   ·讨论第81-85页
     ·关于荧光定量PCR 的引物设计第81-82页
     ·关于标准品的制备第82页
     ·关于相对定量的必要性第82-83页
     ·关于定量结果的可信度第83页
     ·BMPR-IB 和 FSHβ基因的表达与绵羊繁殖性能的关系第83-85页
   ·小结第85-86页
4 实验三 单、双羔蒙古羊卵巢组织差异表达基因的筛选及鉴定第86-121页
   ·实验材料第86-88页
     ·实验动物及其组织第86页
     ·主要仪器和设备第86页
     ·主要试剂第86-87页
     ·载体和菌株第87页
     ·实验中所需的引物序列第87-88页
   ·实验方法第88-98页
     ·卵巢组织总RNA 的提取第88页
     ·单、双羔蒙古羊卵巢组织mRNA 的分离与纯化第88-89页
     ·抑制性消减杂交过程第89-94页
     ·差减文库的构建第94-96页
     ·斑点杂交(Dot Blot)第96-98页
     ·部分差异表达基因的RQ-PCR 验证第98页
   ·结果与分析第98-113页
     ·总RNA 检测及纯化结果第98-99页
     ·cDNA 合成与 RsaI 酶切结果第99页
     ·第二轮PCR 扩增结果第99-100页
     ·差减文库的PCR 鉴定结果第100-101页
     ·斑点杂交筛选第101页
     ·差异克隆测序及序列同源性检索第101-111页
     ·差异表达基因的功能分析第111-112页
     ·部分差异表达基因的RQ-PCR 验证结果第112-113页
   ·讨论第113-120页
     ·关于差异表达基因的筛选第113-115页
     ·部分差异表达基因的功能分析第115-119页
     ·关于部分差异表达基因验证结果分析第119-120页
   ·小结第120-121页
5 实验四 部分差异表达基因的电子克隆及RT-PCR 验证第121-134页
   ·实验材料第121页
   ·实验方法第121-123页
     ·电子克隆方法第121页
     ·RT-PCR 实验验证方法第121-123页
     ·蒙古羊ADAMT51 和Id3 基因的克隆与测序第123页
     ·数据分析第123页
   ·结果与分析第123-129页
     ·电子延伸结果第123-124页
     ·RT-PCR 扩增结果第124-125页
     ·测序结果及序列分析第125-129页
   ·讨论第129-133页
     ·关于电子克隆技术第129-131页
     ·ADAMT51 基因结构及在排卵中的作用第131-132页
     ·Id3 基因结构及生物学功能第132-133页
   ·小结第133-134页
6 结论、创新点及进一步研究问题第134-138页
   ·结论第134-136页
   ·创新点第136页
   ·需进一步研究问题第136-138页
致谢第138-139页
参考文献第139-156页
作者简介第156页

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