摘要 | 第1-5页 |
Abstract | 第5-17页 |
1 引言 | 第17-44页 |
·卵泡的发育模式及调控 | 第17-26页 |
·卵泡发育的基本模式 | 第17-19页 |
·下丘脑-垂体-卵巢轴在卵泡发育过程中的作用 | 第19-23页 |
·生长因子对卵泡发育的调控 | 第23-26页 |
·BMPR-IB 基因作为绵羊繁殖性状候选基因的研究进展 | 第26-30页 |
·骨形态发生蛋白家族及BMPR-IB 基因的发现 | 第26页 |
·BMPR-IB 基因的结构及染色体定位 | 第26-28页 |
·BMPR-IB 基因对绵羊繁殖性能的影响 | 第28-30页 |
·FSHβ基因的研究进展 | 第30-32页 |
·FSHβ基因的结构 | 第30-31页 |
·FSHβ基因与动物繁殖性状的关系 | 第31-32页 |
·FSH 与 BMPs 信号传导通路及相互调控机制 | 第32-34页 |
·本研究中所采用主要方法简介 | 第34-42页 |
·实时荧光定量 PCR(Real-time Quantitative PCR,RQ-PCR) | 第34-37页 |
·抑制性消减杂交技术 | 第37-41页 |
·电子克隆技术(Silicon Cloning) | 第41-42页 |
·本研究的目的、意义及主要研究内容 | 第42-44页 |
2 实验一 蒙古羊BMPR-IB 和FSHβ基因的cDNA 克隆与序列分析 | 第44-70页 |
·实验材料 | 第44-46页 |
·实验动物及其组织 | 第44页 |
·菌株和载体 | 第44页 |
·主要试剂 | 第44-45页 |
·主要仪器和设备 | 第45页 |
·实验常用溶液和试剂的配制 | 第45-46页 |
·主要分子生物学软件及相关网站 | 第46页 |
·实验方法 | 第46-52页 |
·卵巢组织总RNA 的提取 | 第46-47页 |
·RT-PCR 反应过程 | 第47-49页 |
·蒙古羊BMPR-IB 和FSHβ基因的克隆与测序 | 第49-52页 |
·结果与分析 | 第52-65页 |
·蒙古羊卵巢组织总RNA 的提取结果 | 第52-53页 |
·蒙古羊BMPR-IB 和FSHβ基因的RT-PCR 扩增结果 | 第53-54页 |
·扩增产物的克隆及重组质粒的筛选和鉴定 | 第54-55页 |
·蒙古羊BMPR-IB 和FSHβ基因的测序结果及序列拼接 | 第55-57页 |
·蒙古羊BMPR-IB 和FSHβ基因序列分析 | 第57-61页 |
·蒙古羊BMPR-IB 和FSHβ蛋白结构分析 | 第61-65页 |
·讨论 | 第65-69页 |
·BMPR-IB 基因对绵羊繁殖性能的调控 | 第65-67页 |
·FSHβ基因对绵羊繁殖性能的调控 | 第67-69页 |
·小结 | 第69-70页 |
3 实验二 蒙古羊BMPR-IB 和FSHβ基因在不同组织差异表达研究 | 第70-86页 |
·实验材料 | 第70-71页 |
·实验动物及其组织 | 第70页 |
·主要仪器和设备 | 第70页 |
·主要试剂 | 第70-71页 |
·实验方法 | 第71-73页 |
·卵巢组织总RNA 的提取 | 第71页 |
·RQ-PCR 反应过程 | 第71-72页 |
·标准品的制备及标准曲线制作 | 第72-73页 |
·差异表达分析方法 | 第73页 |
·结果与分析 | 第73-81页 |
·蒙古羊各组织总RNA 的提取结果 | 第73页 |
·蒙古羊β-Actin、BMPR-IB 和FSHβ基因的RQ-PCR 扩增结果分析 | 第73-77页 |
·蒙古羊β-Actin、BMPR-IB 和FSHβ基因的RQ-PCR 定量结果分析 | 第77-81页 |
·讨论 | 第81-85页 |
·关于荧光定量PCR 的引物设计 | 第81-82页 |
·关于标准品的制备 | 第82页 |
·关于相对定量的必要性 | 第82-83页 |
·关于定量结果的可信度 | 第83页 |
·BMPR-IB 和 FSHβ基因的表达与绵羊繁殖性能的关系 | 第83-85页 |
·小结 | 第85-86页 |
4 实验三 单、双羔蒙古羊卵巢组织差异表达基因的筛选及鉴定 | 第86-121页 |
·实验材料 | 第86-88页 |
·实验动物及其组织 | 第86页 |
·主要仪器和设备 | 第86页 |
·主要试剂 | 第86-87页 |
·载体和菌株 | 第87页 |
·实验中所需的引物序列 | 第87-88页 |
·实验方法 | 第88-98页 |
·卵巢组织总RNA 的提取 | 第88页 |
·单、双羔蒙古羊卵巢组织mRNA 的分离与纯化 | 第88-89页 |
·抑制性消减杂交过程 | 第89-94页 |
·差减文库的构建 | 第94-96页 |
·斑点杂交(Dot Blot) | 第96-98页 |
·部分差异表达基因的RQ-PCR 验证 | 第98页 |
·结果与分析 | 第98-113页 |
·总RNA 检测及纯化结果 | 第98-99页 |
·cDNA 合成与 RsaI 酶切结果 | 第99页 |
·第二轮PCR 扩增结果 | 第99-100页 |
·差减文库的PCR 鉴定结果 | 第100-101页 |
·斑点杂交筛选 | 第101页 |
·差异克隆测序及序列同源性检索 | 第101-111页 |
·差异表达基因的功能分析 | 第111-112页 |
·部分差异表达基因的RQ-PCR 验证结果 | 第112-113页 |
·讨论 | 第113-120页 |
·关于差异表达基因的筛选 | 第113-115页 |
·部分差异表达基因的功能分析 | 第115-119页 |
·关于部分差异表达基因验证结果分析 | 第119-120页 |
·小结 | 第120-121页 |
5 实验四 部分差异表达基因的电子克隆及RT-PCR 验证 | 第121-134页 |
·实验材料 | 第121页 |
·实验方法 | 第121-123页 |
·电子克隆方法 | 第121页 |
·RT-PCR 实验验证方法 | 第121-123页 |
·蒙古羊ADAMT51 和Id3 基因的克隆与测序 | 第123页 |
·数据分析 | 第123页 |
·结果与分析 | 第123-129页 |
·电子延伸结果 | 第123-124页 |
·RT-PCR 扩增结果 | 第124-125页 |
·测序结果及序列分析 | 第125-129页 |
·讨论 | 第129-133页 |
·关于电子克隆技术 | 第129-131页 |
·ADAMT51 基因结构及在排卵中的作用 | 第131-132页 |
·Id3 基因结构及生物学功能 | 第132-133页 |
·小结 | 第133-134页 |
6 结论、创新点及进一步研究问题 | 第134-138页 |
·结论 | 第134-136页 |
·创新点 | 第136页 |
·需进一步研究问题 | 第136-138页 |
致谢 | 第138-139页 |
参考文献 | 第139-156页 |
作者简介 | 第156页 |