| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-11页 |
| 1 引言 | 第11-32页 |
| ·胚胎干细胞和 PGCS 细胞 | 第11-13页 |
| ·胚胎干细胞 | 第11-12页 |
| ·PGCs 细胞 | 第12-13页 |
| ·胚胎干细胞的研究进展 | 第13-22页 |
| ·鼠胚胎干细胞 | 第13-14页 |
| ·人胚胎干细胞 | 第14-15页 |
| ·兔胚胎干细胞 | 第15-16页 |
| ·牛胚胎干细胞 | 第16页 |
| ·羊胚胎干细胞 | 第16-17页 |
| ·猪胚胎干细胞 | 第17页 |
| ·iPS 细胞 | 第17-20页 |
| ·iPS 细胞研究中存在的问题 | 第20-22页 |
| ·胚胎干细胞的体外培养体系 | 第22-24页 |
| ·有饲养层细胞和无饲养层培养 | 第22页 |
| ·条件培养基(conditionm edium,CM) | 第22-23页 |
| ·细胞因子 | 第23页 |
| ·基础培养基 | 第23页 |
| ·胚胎干细胞的体外分化概况 | 第23-24页 |
| ·调节干细胞自我更新机制的信号通路 | 第24-29页 |
| ·调节小鼠胚胎干细胞自我更新和分化的通路 | 第24-25页 |
| ·调节人胚胎干细胞自我更新和分化的信号通路 | 第25-26页 |
| ·其他对人及小鼠胚胎干细胞都具有调节作用的信号通路 | 第26-27页 |
| ·几种胚胎干细胞特有的基因 | 第27-29页 |
| ·胚胎干细胞研究的应用前景及面临的困难 | 第29-32页 |
| 2 体内囊胚的获取 | 第32-36页 |
| ·实验材料 | 第32页 |
| ·实验试剂及耗材 | 第32页 |
| ·实验设备 | 第32页 |
| ·试剂配方 | 第32页 |
| ·实验方法 | 第32-33页 |
| ·超数排卵 | 第32页 |
| ·人工受精 | 第32-33页 |
| ·手术收集胚胎 | 第33页 |
| ·胚胎分级 | 第33页 |
| ·结果 | 第33-34页 |
| ·讨论 | 第34-35页 |
| ·小结 | 第35-36页 |
| 3 体外受精囊胚的获取 | 第36-42页 |
| ·实验材料 | 第36页 |
| ·仪器及耗材 | 第36页 |
| ·试剂配方 | 第36页 |
| ·实验方法 | 第36-38页 |
| ·血清的制备 | 第36-37页 |
| ·卵母细胞的采集及不同培养体系对卵母细胞成熟影响的比较 | 第37页 |
| ·体外受精方法 | 第37页 |
| ·胚胎的发育培养 | 第37-38页 |
| ·结果 | 第38-40页 |
| ·3 种成熟液中卵母细胞成熟结果 | 第38页 |
| ·3 种发育体系受精卵发育结果 | 第38-39页 |
| ·不同发育阶段的体外受精胚胎 | 第39-40页 |
| ·结果分析及讨论 | 第40-41页 |
| ·小结 | 第41-42页 |
| 4 核移植囊胚的获取 | 第42-49页 |
| ·实验试剂及材料 | 第42页 |
| ·实验仪器 | 第42页 |
| ·试剂配方 | 第42-43页 |
| ·实验方法 | 第43-45页 |
| ·山羊皮肤成纤维细胞原代培养与纯化 | 第43页 |
| ·山羊成纤维细胞的冷冻保存及解冻 | 第43页 |
| ·山羊成纤维细胞生长曲线 | 第43页 |
| ·山羊成纤维细胞染色体的制备 | 第43-44页 |
| ·山羊卵母细胞的体外成熟卵母细胞的采集及体外成熟 | 第44页 |
| ·山羊克隆胚的构建 | 第44页 |
| ·融合 | 第44-45页 |
| ·重构胚的激活及体外培养 | 第45页 |
| ·结果 | 第45-48页 |
| ·内蒙古白绒山羊成纤维细胞生长曲线 | 第45-46页 |
| ·内蒙古白绒山羊成纤维细胞的培养 | 第46页 |
| ·不同融合电压融合效果及发育情况 | 第46页 |
| ·山羊重构胚构建及重构胚发育情况 | 第46-48页 |
| ·讨论 | 第48页 |
| ·小结 | 第48-49页 |
| 5 不同培养条件下山羊 ICM 的生长行为 | 第49-61页 |
| ·实验材料及试剂 | 第49页 |
| ·实验仪器及耗材 | 第49页 |
| ·试剂配方 | 第49-50页 |
| ·实验方法 | 第50-52页 |
| ·不同饲养层细胞培养山羊和全胚半胚培养ICM | 第50-51页 |
| ·不同包被物条件下培养山羊ICM | 第51页 |
| ·在不同包被物包被的平皿中培养ICM | 第51-52页 |
| ·不同培养液中培养山羊 ICM | 第52页 |
| ·山羊 ICM 的传代 | 第52页 |
| ·结果 | 第52-56页 |
| ·囊胚 ICM 在不同饲养层细胞上的生长情况 | 第52-53页 |
| ·小鼠胚胎原代成纤维细胞中不同培养液对ICM 的影响 | 第53页 |
| ·培养液1 条件下不同包被物对山羊体外受精囊胚 ICM 生长的影响 | 第53-54页 |
| ·不同来源囊胚ICM 生长情况 | 第54-56页 |
| ·讨论 | 第56-60页 |
| ·饲养层细胞对ICM 贴壁率的影响 | 第56-57页 |
| ·切半胚胎和全胚对贴壁率的影响 | 第57页 |
| ·两种培养液中内细胞团传代情况 | 第57-58页 |
| ·不同包被物对山羊胚胎干细胞生长的影响 | 第58页 |
| ·不同来源囊胚对ICM 分离的影响 | 第58-60页 |
| ·小结 | 第60-61页 |
| 6 山羊 PGCS 的培养 | 第61-66页 |
| ·实验材料 | 第61页 |
| ·实验仪器及耗材 | 第61页 |
| ·试剂配方 | 第61页 |
| ·实验方法 | 第61-62页 |
| ·饲养层细胞的制备 | 第61-62页 |
| ·原代内蒙古白绒山羊PGCs 的培养 | 第62页 |
| ·原代内蒙古白绒山羊PGCs 的传代培养 | 第62页 |
| ·内蒙古白绒山羊PGCs 的继代培养 | 第62页 |
| ·结果 | 第62-64页 |
| ·讨论 | 第64-65页 |
| ·小结 | 第65-66页 |
| 7 山羊胚胎干细胞的鉴定 | 第66-76页 |
| ·实验材料及试剂 | 第66页 |
| ·仪器及耗材 | 第66页 |
| ·试剂配制 | 第66-67页 |
| ·实验方法 | 第67-70页 |
| ·形态学鉴定 | 第67页 |
| ·碱性磷酸酶染色（AKP） | 第67页 |
| ·RT-PCR 鉴定 | 第67-69页 |
| ·染色体分析 | 第69页 |
| ·免疫荧光鉴定 | 第69页 |
| ·体外分化实验 | 第69-70页 |
| ·结果 | 第70-73页 |
| ·总 RNA 提取结果及PCR 鉴定电泳结果 | 第70页 |
| ·免疫荧光鉴定 | 第70-71页 |
| ·克隆形态学鉴定及AKP 染色结果 | 第71-72页 |
| ·体外分化结果 | 第72-73页 |
| ·讨论 | 第73-75页 |
| ·小结 | 第75-76页 |
| 8 结论 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-93页 |
| 作者简介 | 第93页 |
