| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 绪论 | 第14-22页 |
| 1.1 研究进展 | 第14-19页 |
| 1.1.1 NEDD8的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.1.2 E3 ubiquitin ligases与修饰底物 | 第15-16页 |
| 1.1.3 蛋白质翻译后修饰与病毒之间的关系 | 第16-19页 |
| 1.1.4 MLN4924抑制Neddylation作用研究 | 第19页 |
| 1.2 背景意义 | 第19-20页 |
| 1.3 本论文主要研究内容 | 第20-22页 |
| 第二章 家蚕类泛素化翻译后修饰蛋白NEDD8的cDNA克隆、表达分析和亚细胞定位 | 第22-40页 |
| 2.1 前言 | 第22页 |
| 2.2 实验材料 | 第22-26页 |
| 2.2.1 主要试剂 | 第22-23页 |
| 2.2.2 主要仪器 | 第23-24页 |
| 2.2.3 主要试剂配制 | 第24-26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-33页 |
| 2.3.1 NEDD8基因的克隆与序列测定 | 第26-27页 |
| 2.3.2 序列分析 | 第27页 |
| 2.3.3 获取家蚕不同组织以及不同发育阶段时期的中肠 | 第27页 |
| 2.3.4 RNA提取 | 第27-28页 |
| 2.3.5 RNA的纯度、浓度测定 | 第28页 |
| 2.3.6 反转录实验 | 第28-29页 |
| 2.3.7 实时荧光定量PCR | 第29页 |
| 2.3.8 实时荧光定量PCR的结果分析 | 第29页 |
| 2.3.9 pFastBac1-eGFP-NEDD8融合表达载体构建 | 第29-30页 |
| 2.3.10 重组家蚕杆状病毒质粒Bacmid的获得与鉴定 | 第30-31页 |
| 2.3.11 家蚕BmN细胞的转染与感染 | 第31-32页 |
| 2.3.12 NEDD8在BmN细胞中的定位 | 第32页 |
| 2.3.13 Western Blot | 第32-33页 |
| 2.4 结果与分析 | 第33-38页 |
| 2.4.1 NEDD8扩增 | 第33-34页 |
| 2.4.2 NEDD8序列分析 | 第34-35页 |
| 2.4.3 家蚕NEDD8在家蚕不同组织中的表达 | 第35-36页 |
| 2.4.4 家蚕NEDD8在家蚕化蛹成蛾期的不同发育阶段的表达 | 第36-37页 |
| 2.4.5 家蚕NEDD8在BmN细胞内的定位 | 第37-38页 |
| 2.5 讨论 | 第38-40页 |
| 第三章 Neddylation抑制剂MLN4924对Bm NPV的抑制作用研究 | 第40-54页 |
| 3.1 前言 | 第40页 |
| 3.2 材料与仪器 | 第40页 |
| 3.3 实验方法 | 第40-43页 |
| 3.3.1 BmNPV T3株BV病毒粒子感染家蚕BmN细胞 | 第40-41页 |
| 3.3.2 BmN细胞感染病毒粒子后的RNA提取 | 第41页 |
| 3.3.3 病毒滴度测定 | 第41页 |
| 3.3.4 透射电镜样品制备方法 | 第41-42页 |
| 3.3.5 细胞毒性测定 | 第42页 |
| 3.3.6 细胞凋亡测定 | 第42-43页 |
| 3.4 结果与分析 | 第43-51页 |
| 3.4.1 NEDD8在BmNPV感染家蚕BmN细胞后在mRNA水平和蛋白表达水平上变化 | 第43-44页 |
| 3.4.2 MLN4924对BV粒子产生的影响 | 第44-45页 |
| 3.4.3 MLN4924对多角体形成的影响 | 第45-47页 |
| 3.4.4 电镜观察MLN4924对BmNPV复制的影响 | 第47-48页 |
| 3.4.5 MLN4924对BmNPV基因组DNA复制和蛋白表达的影响 | 第48-50页 |
| 3.4.6 MLN4924对细胞的毒性评估 | 第50-51页 |
| 3.5 讨论 | 第51-54页 |
| 第四章 NEDD8修饰蛋白的鉴定 | 第54-62页 |
| 4.1 前言 | 第54页 |
| 4.2 材料 | 第54页 |
| 4.3 方法 | 第54-55页 |
| 4.3.1 免疫共沉淀步骤 | 第54-55页 |
| 4.3.2 LC–ESI-MS/MS高通量分析 | 第55页 |
| 4.4 结果与分析 | 第55-59页 |
| 4.4.1 LC–ESI-MS/MS质谱分析筛选NEDD化底物蛋白 | 第55-57页 |
| 4.4.2 Gene Ontology（GO分析）注释NEDDylation底物蛋白 | 第57-58页 |
| 4.4.3 KEGG通路分析 | 第58-59页 |
| 4.5 讨论 | 第59-62页 |
| 结论 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第70-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
