| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第1章 绪论 | 第20-26页 |
| 1.1 BmCPV的研究 | 第20-21页 |
| 1.2 BmIBP2研究进展 | 第21-22页 |
| 1.3 互作蛋白和基因功能研究技术 | 第22-24页 |
| 1.3.1 Pull-down实验 | 第23页 |
| 1.3.2 酵母双杂交系统（Y2H） | 第23页 |
| 1.3.3 噬菌体展示技术（PDT） | 第23-24页 |
| 1.3.4 免疫共沉淀（Co-IP） | 第24页 |
| 1.3.6 基因功能研究进展 | 第24页 |
| 1.4 本课题研究目的及意义 | 第24-25页 |
| 1.5 本课题主要研究内容与研究方法 | 第25-26页 |
| 1.5.1 主要研究内容 | 第25页 |
| 1.5.2 实验技术路线 | 第25-26页 |
| 第2章 家蚕类胰岛素相关肽结合蛋白2在家蚕体内的时相表达分析 | 第26-36页 |
| 2.1 引言 | 第26页 |
| 2.2 实验材料与试剂 | 第26-28页 |
| 2.2.1 主要实验材料及试剂 | 第26页 |
| 2.2.2 主要实验仪器及设备 | 第26-27页 |
| 2.2.3 主要试剂的配置 | 第27-28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-30页 |
| 2.3.1 病原接种与取材 | 第28-29页 |
| 2.3.2 总RNA的提取 | 第29页 |
| 2.3.3 反转录反应 | 第29-30页 |
| 2.3.4 实时荧光定量PCR检测BmIBP2基因表达变化 | 第30页 |
| 2.4 结果与分析 | 第30-34页 |
| 2.4.1 家蚕感染BmCPV后BmIBP2基因在中肠中的表达变化 | 第30-31页 |
| 2.4.2 家蚕感染BmNPV后BmIBP2基因在中肠中的表达变化 | 第31-32页 |
| 2.4.3 家蚕感染BmBDV-ZJ后BmIBP2基因在中肠中的表达变化 | 第32页 |
| 2.4.4 家蚕感染白僵菌后BmIBP2基因在中肠中的表达变化 | 第32-33页 |
| 2.4.5 家蚕感染微孢子虫后BmIBP2基因在中肠中的表达变化 | 第33-34页 |
| 2.5 本章讨论 | 第34-36页 |
| 第3章 家蚕类胰岛素相关肽结合蛋白2对家蚕细胞增殖的作用 | 第36-48页 |
| 3.1 引言 | 第36页 |
| 3.2 材料与主要试剂 | 第36-37页 |
| 3.2.1 主要实验材料与试剂 | 第36-37页 |
| 3.2.2 主要实验仪器与设备 | 第37页 |
| 3.2.3 主要试剂的配置 | 第37页 |
| 3.3 实验方法 | 第37-42页 |
| 3.3.1 BmIBP2原核表达载体的构建 | 第37-38页 |
| 3.3.2 融合蛋白的诱导表达 | 第38页 |
| 3.3.3 融合蛋白的纯化 | 第38-39页 |
| 3.3.4 融合蛋白表达结果的鉴定 | 第39-41页 |
| 3.3.5 蛋白浓度测定 | 第41页 |
| 3.3.6 MTT法测定rBmIBP2蛋白对家蚕细胞增殖的影响 | 第41页 |
| 3.3.7 蜕皮激素 20E对BmIBP2的调控作用 | 第41-42页 |
| 3.4 结果与分析 | 第42-44页 |
| 3.4.1 家蚕BmIBP2基因的体外重组表达和检测 | 第42页 |
| 3.4.2 纯化后的rBmIBP2蛋白对家蚕BmN细胞增殖的影响 | 第42-44页 |
| 3.4.3 蜕皮激素 20E对BmIBP2基因的调控作用 | 第44页 |
| 3.5 本章讨论 | 第44-48页 |
| 第4章 家蚕类胰岛素相关肽结合蛋白2基因的RNA干扰和过表达对家蚕细胞增殖的影响 | 第48-56页 |
| 4.1 前言 | 第48页 |
| 4.2 材料与主要试剂 | 第48页 |
| 4.3 实验方法 | 第48-50页 |
| 4.3.1 BmIBP2的RNAi分析 | 第48-49页 |
| 4.3.2 BmIBP2的过表达分析 | 第49-50页 |
| 4.3.3 BmIBP2基因沉默和过表达对家蚕细胞增殖的影响 | 第50页 |
| 4.4 结果分析 | 第50-54页 |
| 4.4.1 BmIBP2的RNAi分析 | 第50-51页 |
| 4.4.2 BmIBP2的过表达分析 | 第51-53页 |
| 4.4.3 BmIBP2基因沉默和过表达对家蚕细胞增殖的影响 | 第53-54页 |
| 4.5 本章讨论 | 第54-56页 |
| 第5章 家蚕类胰岛素相关肽结合蛋白2互作蛋白的筛选与鉴定 | 第56-72页 |
| 5.1 引言 | 第56页 |
| 5.2 实验材料与试剂 | 第56-57页 |
| 5.2.1 主要实验材料与试剂 | 第56页 |
| 5.2.2 主要实验仪器与设备 | 第56页 |
| 5.2.3 主要试剂的配置 | 第56-57页 |
| 5.3 实验方法 | 第57-62页 |
| 5.3.1 BmIBP2基因的PCR扩增 | 第57页 |
| 5.3.2 重组质粒pMD-19T–IBP2和pMD-19T–EGFP的构建及序列测定 | 第57页 |
| 5.3.3 重组转移载体的构建及鉴定 | 第57页 |
| 5.3.4 重组家蚕杆状病毒质粒Bacmid的获得与鉴定 | 第57-58页 |
| 5.3.5 家蚕BmN细胞的转染与感染 | 第58页 |
| 5.3.6 重组蛋白在BmN细胞中的表达与Western blot鉴定 | 第58页 |
| 5.3.7 病毒感染的BmN细胞裂解 | 第58页 |
| 5.3.8 免疫共沉淀反应 | 第58-59页 |
| 5.3.9 SDS-PAGE电泳分析及质谱鉴定 | 第59页 |
| 5.3.10 家蚕ATP合成酶的克隆 | 第59页 |
| 5.3.11 诱饵载体与捕获载体的构建 | 第59-60页 |
| 5.3.12 酵母Y2HGold感受态细胞的制备 | 第60-61页 |
| 5.3.13 载体质粒转化酵母感受态细胞 | 第61-62页 |
| 5.3.14 自激活检测和毒性检测 | 第62页 |
| 5.4 结果与分析 | 第62-69页 |
| 5.4.1 载体pFastBac1-EGFP与pFastBac1-EGFP-IBP2的构建 | 第62-63页 |
| 5.4.2 重组杆状病毒的构建与鉴定 | 第63页 |
| 5.4.3 EGFP-IBP2融合蛋白在细胞中的表达与鉴定 | 第63-65页 |
| 5.4.4 免疫共沉淀产物的分析与质谱检测 | 第65-67页 |
| 5.4.5 诱饵载体和捕获载体的构建结果 | 第67-68页 |
| 5.4.6 目的载体的毒性和自激活性检测 | 第68-69页 |
| 5.4.7 BmIBP2与BmATP之间互作的验证 | 第69页 |
| 5.5 本章讨论 | 第69-72页 |
| 第6章 全文结论和展望 | 第72-76页 |
| 参考文献 | 第76-84页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第84-86页 |
| 致谢 | 第86-88页 |
| 项目资助 | 第88页 |
