| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第1章 前言 | 第10-15页 |
| 1.1 血红蛋白概述 | 第10-11页 |
| 1.2 血红蛋白代谢及应用 | 第11-12页 |
| 1.3. 单克隆抗体技术 | 第12-13页 |
| 1.4 酶联免疫吸附测定(ELISA) | 第13页 |
| 1.5 本课题的研究意义 | 第13-15页 |
| 第2章 实验内容 | 第15-42页 |
| 实验一 牛血红蛋白的提取和纯化 | 第15-17页 |
| 1.1 材料和方法 | 第15-16页 |
| 1.1.1 实验试剂 | 第15页 |
| 1.1.2 牛血红蛋白的提取和纯化 | 第15-16页 |
| 1.1.3 提取牛血红蛋白纯度鉴定 | 第16页 |
| 1.2 结果 | 第16-17页 |
| 1.2.1 牛血红蛋白提取方法的确定 | 第16页 |
| 1.2.2 提取牛血红蛋白的鉴定 | 第16-17页 |
| 实验二 牛血红蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 | 第17-28页 |
| 2.1. 材料 | 第17-18页 |
| 2.1.1 实验动物和细胞 | 第17页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第17页 |
| 2.1.3 主要设备 | 第17-18页 |
| 2.1.4 培养基 | 第18页 |
| 2.2 方法 | 第18-23页 |
| 2.2.1 动物的选择 | 第18页 |
| 2.2.2 动物免疫 | 第18页 |
| 2.2.3 骨髓瘤细胞的准备 | 第18-19页 |
| 2.2.4 饲养细胞的制备 | 第19页 |
| 2.2.5 免疫脾细胞悬液的制备 | 第19页 |
| 2.2.6 细胞融合的步骤 | 第19-20页 |
| 2.2.7 阳性孔的筛选 | 第20页 |
| 2.2.8 有限稀释法对阳性杂交瘤细胞的克隆化 | 第20页 |
| 2.2.9 杂交瘤细胞株稳定性的分析 | 第20-21页 |
| 2.2.10 腹水制备 | 第21页 |
| 2.2.11 腹水及细胞培养上清效价的测定 | 第21页 |
| 2.2.12 单克隆抗体的亚型分析 | 第21页 |
| 2.2.13 Protein A-Sepharose CL-4B亲合层析纯化单克隆抗体 | 第21页 |
| 2.2.14 单克隆抗体的相对亲和力测定 | 第21-22页 |
| 2.2.15 单克隆抗体识别表位分析 | 第22页 |
| 2.2.16 单克隆抗体的特异性分析 | 第22-23页 |
| 2.3 结果 | 第23-26页 |
| 2.3.1 细胞融合及筛选 | 第23页 |
| 2.3.2 杂交瘤细胞株稳定性的分析 | 第23页 |
| 2.3.3 腹水及培养上清效价的测定 | 第23页 |
| 2.3.4 单克隆抗体的亚型分析 | 第23-24页 |
| 2.3.5 单克隆抗体的纯化 | 第24-25页 |
| 2.3.6 单克隆抗体相对亲和力测定结果 | 第25页 |
| 2.3.7 单克隆抗体结合位点的分析 | 第25-26页 |
| 2.4 讨论 | 第26-28页 |
| 2.4.1 动物免疫 | 第26页 |
| 2.4.2 细胞融合 | 第26-27页 |
| 2.4.3 筛选和克隆化 | 第27页 |
| 2.4.4 杂交瘤细胞的冻存与复苏 | 第27-28页 |
| 实验三 牛血红蛋白ELISA检测试剂盒的组装 | 第28-42页 |
| 3.1. 方法 | 第28-31页 |
| 3.1.1 酶标反应板均一性的测定 | 第28页 |
| 3.1.2 抗牛血红蛋白单克隆抗体的辣根过氧化物酶（HRP）标记 | 第28-29页 |
| 3.1.3 酶标单克隆抗体反应浓度的确定 | 第29页 |
| 3.1.4 单克隆抗体包被浓度的确定 | 第29页 |
| 3.1.5 单克隆抗体包被条件的确定 | 第29页 |
| 3.1.6 封闭液的选择 | 第29-30页 |
| 3.1.7 封闭条件的确定 | 第30页 |
| 3.1.8 酶标单抗反应时间的确定 | 第30页 |
| 3.1.9 双抗体夹心ELISA操作步骤 | 第30-31页 |
| 3.1.10 特异性检测 | 第31页 |
| 3.1.11 稳定性试验 | 第31页 |
| 3.1.12 精密度 | 第31页 |
| 3.1.13 试剂盒的应用 | 第31页 |
| 3.2. 结果 | 第31-39页 |
| 3.2.1 酶标反应板均一性的测定 | 第31-32页 |
| 3.2.2 抗牛血红蛋白单克隆抗体的辣根过氧化物酶（HRP）标记 | 第32页 |
| 3.2.3 酶标抗体反应浓度的确定 | 第32-33页 |
| 3.2.4 单抗包被浓度的确定 | 第33-34页 |
| 3.2.5 包被条件的确定 | 第34-35页 |
| 3.2.6 封闭液的选择 | 第35页 |
| 3.2.7 封闭条件的确定 | 第35-36页 |
| 3.2.8 酶标单抗反应时间的确定 | 第36-37页 |
| 3.2.9 特异性检测 | 第37页 |
| 3.2.10 稳定性检测 | 第37-38页 |
| 3.2.11 精密度 | 第38-39页 |
| 3.4. 讨论 | 第39-42页 |
| 3.4.1 固相载体 | 第39页 |
| 3.4.2 包被 | 第39页 |
| 3.4.3 包被蛋白质 | 第39-40页 |
| 3.4.4 酶结合物 | 第40页 |
| 3.4.5 酶底物 | 第40页 |
| 3.4.6 洗涤液与稀释液 | 第40-41页 |
| 3.4.7 结果判断 | 第41-42页 |
| 第3章 结论 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-44页 |
| 附录 | 第44-48页 |
| 致谢 | 第48页 |
