| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 1 前言 | 第8-23页 |
| 1.1 尿苷简介 | 第8-9页 |
| 1.1.1 尿苷结构及理化性质 | 第8页 |
| 1.1.2 尿苷的用途 | 第8页 |
| 1.1.3 尿苷的分析检测方法 | 第8-9页 |
| 1.2 尿苷的生产方法 | 第9-10页 |
| 1.2.1 RNA水解法 | 第9-10页 |
| 1.2.2 化学合成法 | 第10页 |
| 1.2.3 微生物发酵法 | 第10页 |
| 1.3 尿苷的生物合成途径和代谢调控机制 | 第10-14页 |
| 1.3.1 尿苷产生菌 | 第10-11页 |
| 1.3.2 枯草芽孢杆菌中嘧啶核苷的从头合成途径 | 第11-12页 |
| 1.3.3 枯草芽孢杆菌中嘧啶核苷的补救合成途径 | 第12页 |
| 1.3.4 枯草芽孢杆菌中嘧啶核苷的代谢调控机制 | 第12-13页 |
| 1.3.5 氨甲酰磷酸合成酶 | 第13-14页 |
| 1.4 尿苷产生菌的育种策略和育种实例 | 第14-16页 |
| 1.4.1 尿苷产生菌的育种策略 | 第15页 |
| 1.4.2 产尿苷菌种的选育实例 | 第15-16页 |
| 1.5 常压室温等离子(ARTP)诱变简介 | 第16-17页 |
| 1.5.1 ARTP诱变的原理 | 第16-17页 |
| 1.5.2 ARTP诱变方法的显著特点 | 第17页 |
| 1.5.3 ARTP的应用实例 | 第17页 |
| 1.6 高通量筛选技术在菌种选育中的应用 | 第17-21页 |
| 1.6.1 突变体库的建立 | 第18页 |
| 1.6.2 高通量培养 | 第18-19页 |
| 1.6.3 高通量分析检测技术 | 第19-21页 |
| 1.7 立题背景及研究内容 | 第21-23页 |
| 1.7.1 立题背景 | 第21页 |
| 1.7.2 本论文的研究目的和研究内容 | 第21-22页 |
| 1.7.3 本论文的技术路线 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-27页 |
| 2.1.1 菌株 | 第23页 |
| 2.1.2 引物 | 第23-24页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第24-25页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.5 主要溶液 | 第26页 |
| 2.1.6 主要培养基 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-32页 |
| 2.2.1 ARTP诱变方法 | 第27页 |
| 2.2.2 高通量筛选尿苷酸结构类似物抗性突变株的方法 | 第27-28页 |
| 2.2.3 发酵生产尿苷的培养方法及分析检测方法 | 第28-29页 |
| 2.2.4 枯草芽孢杆菌基因组DNA的小量提取 | 第29页 |
| 2.2.5 目的基因的扩增 | 第29-30页 |
| 2.2.6 琼脂糖凝胶电泳 | 第30页 |
| 2.2.7 DNA的回收纯化 | 第30-32页 |
| 3 结果与讨论 | 第32-54页 |
| 3.1 常压室温等离子诱变及高通量筛选方法的建立 | 第32-39页 |
| 3.1.1 出发菌株TD131生长曲线的绘制 | 第32页 |
| 3.1.2 ARTP对出发菌株TD131的致死率曲线的绘制 | 第32-33页 |
| 3.1.3 高通量快速检测尿苷浓度方法的建立 | 第33-35页 |
| 3.1.4 96孔板培养方法的确立 | 第35-39页 |
| 3.2 ARTP诱变结合高通量筛选选育尿苷高产菌 | 第39-51页 |
| 3.2.1 抗2-TU突变株(2-TU~r mutants)的筛选 | 第39-44页 |
| 3.2.2 抗6-AU突变株(6-AU~r mutants)的筛选 | 第44-48页 |
| 3.2.3 抗5-FU突变株(5-FU~r mutants)的筛选 | 第48-50页 |
| 3.2.4 筛选小结 | 第50-51页 |
| 3.3 所筛菌株的遗传稳定性检测 | 第51页 |
| 3.4 所筛菌株在5L罐上的发酵性能检测 | 第51-53页 |
| 3.5 所筛菌株嘧啶核苷操纵子的测序结果 | 第53-54页 |
| 4 结论 | 第54-55页 |
| 5 展望 | 第55-56页 |
| 6 参考文献 | 第56-62页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第62-63页 |
| 8 致谢 | 第63页 |
