| 致谢 | 第6-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1. 综述 | 第18-42页 |
| 1.1. 玉米褪绿斑驳病毒特性 | 第18-26页 |
| 1.1.1. 病毒粒子的理化特性 | 第18页 |
| 1.1.2. 基因组结构 | 第18-21页 |
| 1.1.3. MCMV的分子进化 | 第21-22页 |
| 1.1.4. MCMV的寄主和传播介体 | 第22-24页 |
| 1.1.5. MCMV的地理分布 | 第24页 |
| 1.1.6. 玉米致死性坏死病(CLND) | 第24-26页 |
| 1.2. 植物RNA病毒侵染性克隆 | 第26-37页 |
| 1.2.1. 植物RNA病毒侵染性克隆制备方法 | 第26-30页 |
| 1.2.2. 影响植物RNA病毒侵染性克隆构建的因素 | 第30-33页 |
| 1.2.3. 植物RNA病毒侵染性克隆的应用 | 第33-37页 |
| 1.3. 植物RNA病毒的检测 | 第37-39页 |
| 1.3.1. 生物学方法 | 第38页 |
| 1.3.2. 血清学 | 第38页 |
| 1.3.3. 分子生物学方法 | 第38-39页 |
| 1.4. 研究目的与意义 | 第39-42页 |
| 2. 常规分子生物学实验方法 | 第42-56页 |
| 2.1. 培养基配制方法 | 第42-43页 |
| 2.1.1. LB培养基(Luria Broth) | 第42页 |
| 2.1.2. SOC培养基 | 第42页 |
| 2.1.3. YEP培养基 | 第42-43页 |
| 2.2. Trizol法提取植物总RNA | 第43页 |
| 2.3. 植物总蛋白提取 | 第43页 |
| 2.4. 电子显微镜常温包埋样品制备 | 第43-44页 |
| 2.5. 常规分子克隆方法 | 第44-51页 |
| 2.5.1. PCR | 第44-45页 |
| 2.5.2. TA克隆 | 第45页 |
| 2.5.3. RT-PCR制备cDNA | 第45页 |
| 2.5.4. 限制性内切酶与连接酶 | 第45-46页 |
| 2.5.5. 大肠杆菌感受态细胞制备与转化 | 第46-47页 |
| 2.5.6. 小量质粒提取 | 第47-48页 |
| 2.5.7. In-Fusion克隆 | 第48页 |
| 2.5.8. Gateway克隆 | 第48-49页 |
| 2.5.9. 农杆菌感受态细胞制备与电击转化 | 第49-51页 |
| 2.6. 分子杂交 | 第51-56页 |
| 2.6.1. Northern Blot | 第51-54页 |
| 2.6.2. Western blot | 第54-56页 |
| 3. MCMV单克隆抗体制备 | 第56-69页 |
| 3.1. 材料和方法 | 第56-61页 |
| 3.1.1. 病毒毒源,培养基和抗体 | 第56页 |
| 3.1.2. 玉米褪绿斑驳病毒的提纯 | 第56-57页 |
| 3.1.3. 多克隆抗体的制备 | 第57页 |
| 3.1.4. 单克隆抗体的制备 | 第57-61页 |
| 3.2. 结果与分析 | 第61-67页 |
| 3.2.1. 玉米褪绿斑驳病毒的提纯及抗原制备 | 第61页 |
| 3.2.2. 杂交瘤细胞 | 第61-62页 |
| 3.2.3. 腹水抗体制备、效价测定及抗体亚类鉴定 | 第62-63页 |
| 3.2.4. Western blot | 第63-64页 |
| 3.2.5. 单抗的特异性和灵敏度 | 第64-65页 |
| 3.2.6. TAS-ELISA检测方法 | 第65-66页 |
| 3.2.7. DIBA检测方法 | 第66页 |
| 3.2.8. IC-RT-PCR | 第66-67页 |
| 3.3. 讨论 | 第67-69页 |
| 4. MCMV在中国的发生、分布、序列测定及分子进化分析 | 第69-83页 |
| 4.1. 材料与方法 | 第69-71页 |
| 4.1.1. 病毒样品的来源和采集 | 第69页 |
| 4.1.2. ELISA和抗体 | 第69页 |
| 4.1.3. 病叶组织总RNA的提取 | 第69页 |
| 4.1.4. MCMV病毒基因组全长cDNA克隆及测序 | 第69-71页 |
| 4.1.5. 序列比对分析 | 第71页 |
| 4.2. 结果与分析 | 第71-80页 |
| 4.2.1. MCMV及CLND在中国发生 | 第71-75页 |
| 4.2.2. MCMV及CLND在中国的分布 | 第75-78页 |
| 4.2.3. MCMV全序列测序及分子进化分析 | 第78-80页 |
| 4.3. 讨论 | 第80-83页 |
| 5. MCMV侵染性克隆构建及致病性测定 | 第83-97页 |
| 5.1. 材料与方法 | 第83-87页 |
| 5.1.1. 酶,质粒,细菌株系 | 第83-84页 |
| 5.1.2. MCMV病毒粒子的分离 | 第84页 |
| 5.1.3. MCMV全长基因组cDNA克隆 | 第84页 |
| 5.1.4. 农杆菌培养与处理 | 第84-85页 |
| 5.1.5. 农杆菌接种 | 第85-86页 |
| 5.1.6. Northern blot | 第86-87页 |
| 5.2. 结果与分析 | 第87-95页 |
| 5.2.1. MCMV侵染性克隆载体的构建 | 第87-92页 |
| 5.2.2. MCMV对不同玉米品种的致病性 | 第92-93页 |
| 5.2.3. P32功能初探 | 第93-95页 |
| 5.3. 讨论 | 第95-97页 |
| 6. MCMV的致病机理研究 | 第97-148页 |
| 6.1. MCMV单独侵染和MCMV+SCMV复合侵染玉米的细胞病理学比较 | 第97-102页 |
| 6.1.1. 材料与方法 | 第97-100页 |
| 6.1.2. 结果与分析 | 第100-102页 |
| 6.2. MCMV单独侵染和MCMV+SCMV复合侵染玉米的转录组比较 | 第102-129页 |
| 6.2.1. 材料与方法 | 第102-104页 |
| 6.2.2. 结果与分析 | 第104-129页 |
| 6.3. MCMV的复制机制初步研究 | 第129-143页 |
| 6.3.1. 材料与方法 | 第129-131页 |
| 6.3.2. 结果与分析 | 第131-143页 |
| 6.4. 讨论 | 第143-148页 |
| 7. 全文小结 | 第148-150页 |
| 附录Ⅰ 苦苣菜黄网病毒侵染性克隆的构建 | 第150-173页 |
| I.1. 综述 | 第150-158页 |
| I.1.1. 苦苣菜黄网病毒 | 第150-152页 |
| I.1.2. SYNV基因组复制与mRNA转录 | 第152-154页 |
| I.1.3. 负义RNA病毒反向遗传学 | 第154-157页 |
| I.1.4. 研究内容与研究意义 | 第157-158页 |
| I.2. 材料与方法 | 第158-159页 |
| I.2.1. 试剂 | 第158页 |
| I.2.2. 病毒来源与保存 | 第158页 |
| I.2.3. 质粒和细菌株系 | 第158-159页 |
| I.3. 结果与分析 | 第159-171页 |
| I.3.1. SYNV全长cDNA克隆及测序分析 | 第159-161页 |
| I.3.2. 侵染性克隆接种 | 第161-164页 |
| I.3.3. SYNV全长侵染性克隆具有侵染性 | 第164-167页 |
| I.3.4. 侵染性克隆分子检测 | 第167-169页 |
| I.3.5. 侵染性克隆优化 | 第169-171页 |
| I.4. 讨论 | 第171-173页 |
| 附录Ⅱ 常用缓冲液及培养基配方 | 第173-179页 |
| 附录Ⅲ 本论文中所用术语缩写与中英文对照 | 第179-181页 |
| 在学期间科研论文 | 第181-182页 |
| 参考文献 | 第182-194页 |
