| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第15-38页 |
| 1.1 植物细胞全能性 | 第15-16页 |
| 1.1.1 植物细胞全能性的概念 | 第15页 |
| 1.1.2 植物细胞全能性的国内外研究现状 | 第15-16页 |
| 1.2 离体器官发生中的细胞全能性 | 第16-27页 |
| 1.2.1 愈伤组织的形成是植物细胞多能性与全能性的结合 | 第16-24页 |
| 1.2.1.1 愈伤组织的细胞学特性 | 第16-17页 |
| 1.2.1.2 愈伤组织的来源 | 第17-19页 |
| 1.2.1.3 愈伤组织形成的分子基础 | 第19-24页 |
| 1.2.2 离体器官的发生是植物细胞多能性的表达 | 第24-27页 |
| 1.2.2.1 离体器官的发生 | 第24-25页 |
| 1.2.2.2 离体器官再生过程中激素之间的相互作用 | 第25-27页 |
| 1.2.2.3 表观遗传修饰参与调控激素诱导的离体器官再生 | 第27页 |
| 1.3 体细胞胚胎发生与植物细胞全能性 | 第27-29页 |
| 1.3.1 体细胞胚胎发生体系的建立与发展 | 第27-29页 |
| 1.3.2 体细胞胚胎发生是细胞全能性的完全体现 | 第29页 |
| 1.4 体细胞胚胎发生的分子机理 | 第29-36页 |
| 1.4.1 基因异位表达诱导体细胞胚的发生 | 第29-32页 |
| 1.4.2 植物激素与体细胞胚的形成 | 第32-34页 |
| 1.4.2.1 生长素对体细胞胚胎发生的调节作用 | 第32-33页 |
| 1.4.2.2 细胞分裂素调控体细胞胚根端分生组织的建立 | 第33-34页 |
| 1.4.3 体细胞胚胎发生过程中干细胞的形成 | 第34-36页 |
| 1.5 本研究的目的及意义 | 第36-38页 |
| 2 材料与方法 | 第38-55页 |
| 2.1 实验材料 | 第38-39页 |
| 2.1.1 植物材料及生长条件 | 第38页 |
| 2.1.2 菌株 | 第38页 |
| 2.1.3 酶、生化试剂及仪器 | 第38-39页 |
| 2.2 实验方法 | 第39-55页 |
| 2.2.1 拟南芥的种植与培养 | 第39页 |
| 2.2.2 表达载体的构建及拟南芥的转化 | 第39-42页 |
| 2.2.2.1 PCR扩增 | 第39-40页 |
| 2.2.2.2 连接反应 | 第40页 |
| 2.2.2.3 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第40-41页 |
| 2.2.2.4 质粒DNA的酶切及鉴定 | 第41页 |
| 2.2.2.5 农杆菌介导的拟南芥遗传转化 | 第41-42页 |
| 2.2.3 基因组DNA的提取 | 第42-43页 |
| 2.2.4 组织总RNA的提取 | 第43页 |
| 2.2.5 反转录cDNA第一链的合成 | 第43-44页 |
| 2.2.6 实时定量PCR | 第44-45页 |
| 2.2.7 GUS染色分析和石蜡切片 | 第45-46页 |
| 2.2.8 半薄切片与电子显微镜的制样观察 | 第46-47页 |
| 2.2.9 激光显微切割系统流程 | 第47-48页 |
| 2.2.10 扫描电子显微镜观察 | 第48-49页 |
| 2.2.11 微分干涉差显微观察 | 第49页 |
| 2.2.12 共聚焦显微镜观察和图像处理 | 第49页 |
| 2.2.13 LEC2蛋白表达纯化 | 第49-51页 |
| 2.2.14 凝胶迁移实验(EMSA) | 第51-52页 |
| 2.2.14.1 生物素标记EMSA探针的制备 | 第51页 |
| 2.2.14.2 6%非变性聚丙烯酰胺凝胶的制备 | 第51页 |
| 2.2.14.3 DNA探针与蛋白质结合 | 第51-52页 |
| 2.2.14.4 电泳和转膜 | 第52页 |
| 2.2.15 染色质免疫共沉淀(ChIP) | 第52-55页 |
| 2.2.15.1 染色质交联 | 第52-54页 |
| 2.2.15.2 ChIP实验过程中所用试剂配方 | 第54-55页 |
| 3 结果与分析 | 第55-95页 |
| 3.1 子叶直接诱导体细胞胚胎发生系统的建立 | 第55-56页 |
| 3.2 体细胞胚胎发生的分子特征 | 第56-63页 |
| 3.2.1 体细胞胚起源于全能干细胞 | 第56-58页 |
| 3.2.2 合子胚特征基因LEC1和SERK1特异的在全能干细胞中表达 | 第58-60页 |
| 3.2.3 原表皮特征基因ATML1标记体细胞胚的原表皮形成 | 第60页 |
| 3.2.4 体细胞胚形成过程中生长素和细胞分裂素的响应模式 | 第60-63页 |
| 3.2.4.1 体细胞胚胎发生过程中生长素的响应模式 | 第61-62页 |
| 3.2.4.2 体细胞胚胎发生过程中生长素合成关键酶基因YUC4的表达模式 | 第62-63页 |
| 3.2.4.3 体细胞胚胎发生过程中细胞分裂素的响应模式 | 第63页 |
| 3.3 体细胞胚胎发生过程中微丝及内质网的形态变化 | 第63-65页 |
| 3.4 细胞全能性基因调控网络的建立 | 第65-68页 |
| 3.4.1 利用荧光捕获技术特异性获取全能干细胞 | 第65页 |
| 3.4.2 鉴定全能干细胞中特异高水平表达的细胞全能性调控因子 | 第65-67页 |
| 3.4.3 利用生物信息学分析建立细胞全能性基因调控网络 | 第67-68页 |
| 3.5 关键调控因子的功能分析 | 第68-82页 |
| 3.5.1 TP1表达模式分析及调控细胞全能性的功能分析 | 第68-71页 |
| 3.5.2 TP2表达模式分析及调控细胞全能性的功能分析 | 第71-74页 |
| 3.5.3 CUC1在体细胞胚胎发生中的表达模式及调控合子胚发育的功能分析 | 第74-76页 |
| 3.5.4 HSD1调控细胞全能性的功能研究 | 第76-77页 |
| 3.5.5 SPCH在体细胞胚胎发生中的表达模式分析及其功能研究 | 第77-80页 |
| 3.5.6 细胞全能性调控网络中其它因子的功能研究 | 第80-82页 |
| 3.6 与动物细胞全能性调控因子同源性较高的调控因子的功能研究 | 第82-87页 |
| 3.7 功能未知的全能性调控因子的功能研究 | 第87-95页 |
| 3.7.1 UTP1调控胚胎发育的功能及其表达模式分析 | 第87-89页 |
| 3.7.2 UTP2调控胚胎发育的功能及其表达模式分析 | 第89-91页 |
| 3.7.3 其它功能未知基因的功能研究 | 第91-95页 |
| 4 讨论 | 第95-104页 |
| 4.1 体细胞胚来源于全能干细胞 | 第95-96页 |
| 4.2 体细胞胚与合子胚胎发生的异同 | 第96-99页 |
| 4.3 细胞全能性在植物细胞与动物细胞中的比较 | 第99-101页 |
| 4.4 体细胞胚胎发生中细胞全能性的基因调控网络 | 第101-104页 |
| 5 结论 | 第104-105页 |
| 参考文献 | 第105-124页 |
| 致谢 | 第124-125页 |
| 攻读学位期间发表的论文及成果 | 第125页 |
