| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第1章 前言 | 第10-27页 |
| ·直链麦芽寡糖 | 第10-14页 |
| ·淀粉 | 第10-11页 |
| ·环糊精 | 第11-12页 |
| ·低聚糖 | 第12-13页 |
| ·特定长度的直链麦芽寡糖 | 第13-14页 |
| ·淀粉酶 | 第14-18页 |
| ·α-淀粉酶(EC 3.2.1.1) | 第14-15页 |
| ·β-淀粉酶(EC 3.2.1.2) | 第15-16页 |
| ·糖化酶(EC3.2.1.3) | 第16页 |
| ·异淀粉酶(EC3.2.1.68) | 第16-17页 |
| ·普鲁兰酶(EC3.2.1.41) | 第17页 |
| ·环糊精葡萄糖基转移酶(EC 2.4.1.19) | 第17-18页 |
| ·环葡聚糖基水解酶(EC 3.2.1.54) | 第18页 |
| ·耐高温淀粉酶(PFTA) | 第18-25页 |
| ·耐高温淀粉酶(PFTA)的结构 | 第18-20页 |
| ·耐高温淀粉酶(PFTA)的催化机理 | 第20页 |
| ·耐高温淀粉酶(PFTA)活力的测定方法 | 第20-21页 |
| ·耐高温淀粉酶(PFTA)的用途 | 第21-25页 |
| ·本研究的主要意义 | 第25-27页 |
| 第2章 重组蛋白PFTA在大肠杆菌中的克隆、表达与纯化 | 第27-46页 |
| ·实验材料 | 第27-31页 |
| ·菌株与质粒 | 第27-28页 |
| ·培养基 | 第28页 |
| ·酶、试剂盒及其他 | 第28页 |
| ·主要仪器设备 | 第28-29页 |
| ·主要溶液 | 第29-31页 |
| ·实验方法 | 第31-40页 |
| ·目的基因的分子克隆 | 第31-35页 |
| ·重组蛋白His-PFTA的克隆和表达 | 第35-36页 |
| ·重组蛋白His-PFTA的Ni~(2+)-NTA柱亲和层析纯化 | 第36页 |
| ·重组蛋白His-PFTA酶活力的测定 | 第36-40页 |
| ·结果 | 第40-45页 |
| ·基因片段PFTA的克隆与pT7473-His-PFTA重组载体的构建 | 第40页 |
| ·不同IPTG诱导浓度对重组蛋白表达量的影响 | 第40-41页 |
| ·不同诱导时间对重组蛋白表达量的影响 | 第41-42页 |
| ·不同诱导温度对重组蛋白表达量的影响 | 第42-43页 |
| ·PFTA重组蛋白在大肠杆菌中的表达与表达形式的鉴定 | 第43-44页 |
| ·目的蛋白PFTA的纯化 | 第44-45页 |
| ·PFTA酶活、浓度与比活的计算 | 第45页 |
| ·本章小结 | 第45-46页 |
| 第3章 PFTA基本性质的鉴定 | 第46-53页 |
| ·实验材料 | 第46-47页 |
| ·主要试剂 | 第46-47页 |
| ·主要设备 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47-48页 |
| ·pH对PFTA活性的影响 | 第47页 |
| ·pH对PFTA稳定性的影响 | 第47-48页 |
| ·温度对PFTA活性的影响 | 第48页 |
| ·温度对PFTA稳定性的影响 | 第48页 |
| ·实验结果 | 第48-51页 |
| ·pH对PFTA活性的影响 | 第48-49页 |
| ·pH对PFTA稳定性的影响 | 第49-50页 |
| ·温度对PFTA活性的影响 | 第50页 |
| ·温度对PFTA稳定性的影响 | 第50-51页 |
| ·本章小结 | 第51-53页 |
| 第4章 PFTA用于直链麦芽寡糖的制备 | 第53-63页 |
| ·实验材料 | 第53-54页 |
| ·主要试剂 | 第53-54页 |
| ·主要仪器设备 | 第54页 |
| ·主要溶液 | 第54页 |
| ·实验方法 | 第54-56页 |
| ·硅胶板的活化处理 | 第54页 |
| ·点样 | 第54页 |
| ·展开 | 第54-55页 |
| ·PFTA在不同的酶切时间条件下降解β-环糊精 | 第55页 |
| ·PFTA酶切低浓度环糊精制备特定长度的麦芽寡糖 | 第55页 |
| ·PFTA酶切高浓度环糊精制备特定长度的麦芽寡糖 | 第55-56页 |
| ·疏水层析分离酶切高浓度环糊精后的产物 | 第56页 |
| ·实验结果 | 第56-61页 |
| ·PFTA在不同的酶切时间条件下降解β-环糊精 | 第56-57页 |
| ·PFTA酶切低浓度环糊精制备特定长度的麦芽寡糖的结果 | 第57-58页 |
| ·PFTA酶切高浓度环糊精制备特定长度的麦芽寡糖的结果 | 第58-59页 |
| ·PFTA作用机理的解释 | 第59-60页 |
| ·疏水层析分离PFTA酶切高浓度环糊精的产物的结果 | 第60-61页 |
| ·本章小结 | 第61-63页 |
| ·耐高温淀粉酶PFTA降解低浓度环糊精制备直链麦芽寡糖的结果 | 第61页 |
| ·耐高温淀粉酶PFTA降解高浓度环糊精制备直链麦芽寡糖的结果 | 第61-62页 |
| ·疏水层析分离PFTA酶切高浓度环糊精的产物的结果 | 第62-63页 |
| 结论 | 第63-66页 |
| 1 耐高温α-淀粉酶PFTA的克隆、表达与纯化 | 第63页 |
| 2 耐高温α-淀粉酶PFTA活力与比活的测定 | 第63页 |
| 3 耐高温α-淀粉酶PFTA基本性质的探索 | 第63-64页 |
| 4 耐高温淀粉酶PFTA降解环糊精制备直链麦芽寡糖的结果 | 第64页 |
| 5 耐高温淀粉酶PFTA在规模化级别降解环糊精制备直链麦芽寡糖的结果 | 第64-65页 |
| 6 疏水层析分离PFTA酶切高浓度环糊精的产物的结果 | 第65-66页 |
| 展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 发表文章 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
