| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第1章 研究背景 | 第12-22页 |
| ·脂肪酶概况 | 第12-15页 |
| ·脂肪酶简介 | 第12页 |
| ·脂肪酶的结构特点 | 第12-14页 |
| ·脂肪酶的理化特性 | 第14-15页 |
| ·酶法合成生物柴油的研究现状 | 第15-17页 |
| ·脂肪酶固定化的研究进展 | 第17-18页 |
| ·有机相中酶的作用机理研究 | 第18-20页 |
| ·基因的体外定向突变 | 第20-21页 |
| ·本课题的研究目的及意义 | 第21-22页 |
| 第2章 粘质沙雷氏菌LipA催化合成生物柴油的工艺研究 | 第22-32页 |
| ·引言 | 第22页 |
| ·实验材料与设备 | 第22-23页 |
| ·实验试剂 | 第22页 |
| ·实验设备 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-24页 |
| ·油脂(大豆油)基本理化参数的测定 | 第23页 |
| ·甘油含量的测定(甘油铜比色法) | 第23-24页 |
| ·生物柴油的合成 | 第24页 |
| ·实验结果与讨论 | 第24-30页 |
| ·原料(大豆油)基本理化性质分析 | 第24-25页 |
| ·不同脂肪酶催化油脂反应性能的研究 | 第25页 |
| ·反应时间对FAME转化率的影响 | 第25-26页 |
| ·醇油摩尔比对FAME转化率的影响 | 第26-27页 |
| ·甲醇流加次数对FAME转化率的影响 | 第27页 |
| ·有机溶剂类型对FAME转化率的影响 | 第27-28页 |
| ·有机溶剂用量对FAME转化率的影响 | 第28-29页 |
| ·反应温度对FAME转化率的影响 | 第29-30页 |
| ·酶用量对FAME转化率的影响 | 第30页 |
| ·验证实验结果分析 | 第30页 |
| ·小结 | 第30-32页 |
| 第3章 响应面法(RSM)优化酶法合成生物柴油的工艺条件 | 第32-39页 |
| ·引言 | 第32页 |
| ·实验材料与设备 | 第32页 |
| ·实验方法 | 第32-33页 |
| ·转酯反应 | 第32页 |
| ·试验设计 | 第32-33页 |
| ·实验结果与讨论 | 第33-38页 |
| ·显著影响因素的筛选 | 第33-34页 |
| ·最陡爬坡实验 | 第34页 |
| ·中心组合设计及响应面分析 | 第34-36页 |
| ·验证实验 | 第36-38页 |
| ·小结 | 第38-39页 |
| 第4章 粘质沙雷氏菌LipA活性包涵体的固定化研究 | 第39-47页 |
| ·引言 | 第39页 |
| ·实验材料与设备 | 第39-40页 |
| ·菌株及实验试剂 | 第39页 |
| ·实验设备 | 第39-40页 |
| ·实验方法 | 第40-41页 |
| ·脂肪酶活性包涵体的制备 | 第40页 |
| ·脂肪酶活性包涵体的固定化 | 第40页 |
| ·脂肪酶活性的测定 | 第40页 |
| ·试验设计 | 第40-41页 |
| ·实验结果与讨论 | 第41-46页 |
| ·因子试验筛选显著影响因素 | 第41页 |
| ·最陡爬坡实验 | 第41-42页 |
| ·Box-Behnken设计优化固定化条件 | 第42-45页 |
| ·验证实验 | 第45-46页 |
| ·小结 | 第46-47页 |
| 第5章 固定化粘质沙雷氏菌LipA活性包涵体的性质研究 | 第47-53页 |
| ·引言 | 第47页 |
| ·实验材料与设备 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47-48页 |
| ·脂肪酶活性包涵体的制备 | 第47页 |
| ·脂肪酶活性包涵体的固定化 | 第47页 |
| ·脂肪酶活性的测定 | 第47页 |
| ·固定化酶的性质研究 | 第47-48页 |
| ·实验结果与讨论 | 第48-52页 |
| ·pH稳定性 | 第48-49页 |
| ·热稳定性 | 第49页 |
| ·Km值的测定 | 第49-50页 |
| ·有机溶剂耐受性 | 第50页 |
| ·金属离子及表面活性剂对酶稳定性的影响 | 第50-51页 |
| ·操作稳定性 | 第51页 |
| ·贮存稳定性 | 第51-52页 |
| ·小结 | 第52-53页 |
| 第6章 粘质沙雷氏菌LipB突变体的克隆及表达 | 第53-63页 |
| ·引言 | 第53页 |
| ·实验材料与设备 | 第53-54页 |
| ·菌株及实验试剂 | 第53-54页 |
| ·实验设备 | 第54页 |
| ·实验方法 | 第54-58页 |
| ·质粒DNA的抽提 | 第54页 |
| ·目的片段的PCR扩增 | 第54-56页 |
| ·DNA的回收 | 第56-57页 |
| ·DNA的限制性内切酶酶切 | 第57页 |
| ·DNA的连接 | 第57页 |
| ·重组质粒的转化 | 第57-58页 |
| ·重组子的筛选及鉴定 | 第58页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第58页 |
| ·实验结果与讨论 | 第58-62页 |
| ·野生型S.marcescens LipB表达质粒的抽提 | 第58-59页 |
| ·LipB突变体的PCR扩增 | 第59-61页 |
| ·PCR产物及质粒的双酶切 | 第61-62页 |
| ·酶切产物与载体的连接、转化 | 第62页 |
| ·重组子的筛选及鉴定 | 第62页 |
| ·小结 | 第62-63页 |
| 第7章 粘质沙雷氏菌LipB突变体的有机溶剂耐受性及结构分析 | 第63-70页 |
| ·引言 | 第63页 |
| ·实验材料与设备 | 第63-64页 |
| ·菌株及实验试剂 | 第63页 |
| ·实验设备 | 第63-64页 |
| ·实验方法 | 第64页 |
| ·LipB突变体的制备 | 第64页 |
| ·有机溶剂耐受性 | 第64页 |
| ·LipB突变体的结构分析 | 第64页 |
| ·实验结果与讨论 | 第64-69页 |
| ·LipB突变体的有机溶剂耐受性比较 | 第64-66页 |
| ·LipB突变体的结构分析 | 第66-69页 |
| ·小结 | 第69-70页 |
| 第8章 结论与展望 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
