| 中文摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 英文缩略表 | 第7-11页 |
| 第一部分 文献综述及研究目的与意义 | 第11-17页 |
| 第一章 鸭圆环病毒Cap基因及其编码蛋白的研究进展 | 第11-17页 |
| 0 引言 | 第11页 |
| 1 圆环病毒Cap基因及其编码蛋白的特点 | 第11-13页 |
| ·Cap基因序列的特点 | 第11-12页 |
| ·Cap基因编码的衣壳蛋白特点 | 第12-13页 |
| ·衣壳蛋白的组成 | 第12页 |
| ·衣壳蛋白空间结构 | 第12页 |
| ·衣壳蛋白的抗原性 | 第12-13页 |
| ·衣壳蛋白的定位 | 第13页 |
| 2 圆环病毒衣壳蛋白的功能 | 第13-15页 |
| ·衣壳蛋白在病毒吸附中的作用 | 第13-14页 |
| ·衣壳蛋白在病毒粒子运输中的作用 | 第14页 |
| ·衣壳蛋白在病毒复制中的调控作用 | 第14-15页 |
| 3 衣壳蛋白与其他蛋白的作用 | 第15-16页 |
| ·衣壳蛋白与MKRN1蛋白 | 第15页 |
| ·衣壳蛋白与Hsp40蛋白 | 第15页 |
| ·衣壳蛋白与gC1qR、C1qB蛋白 | 第15-16页 |
| 4 展望 | 第16页 |
| 5 选题目的与意义 | 第16-17页 |
| 第二部分 试验研究 | 第17-49页 |
| 第二章 鸭圆环病毒GH01株Cap蛋白原核表达及多克隆抗体的制备 | 第17-28页 |
| 1 材料 | 第17-18页 |
| ·载体、受体菌及实验动物 | 第17页 |
| ·主要试验仪器 | 第17页 |
| ·主要试剂 | 第17-18页 |
| 2 方法 | 第18-22页 |
| ·Cap基因密码子的优化 | 第18页 |
| ·Cap基因T克隆质粒的构建 | 第18-19页 |
| ·Cap109-771基因的PCR扩增 | 第18页 |
| ·CapY108基因的融合扩增和连接 | 第18-19页 |
| ·CapY108基因T克隆质粒的转化 | 第19页 |
| ·重组质粒pMD-CapY108的酶切鉴定与测序 | 第19页 |
| ·重组表达质粒pET32-CapY108的构建 | 第19-20页 |
| ·重组质粒与表达载体的酶切与回收 | 第19页 |
| ·重组表达质粒pET32-CapY108的连接 | 第19-20页 |
| ·重组表达质粒pET32-CapY108的转化 | 第20页 |
| ·重组表达质粒pET32-CapY108的鉴定 | 第20页 |
| ·重组表达质粒pET32-CapY108的原核表达 | 第20-21页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第20页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第20-21页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第21页 |
| ·纯化蛋白浓度的测定 | 第21页 |
| ·纯化蛋白的Western blot检测 | 第21页 |
| ·Cap蛋白兔多克隆抗体的制备 | 第21-22页 |
| ·Cap蛋白多克隆抗体的效价检测 | 第22页 |
| ·Cap蛋白多克隆抗体的Western blot鉴定 | 第22页 |
| 3 结果 | 第22-26页 |
| ·CapY108基因的扩增 | 第22-23页 |
| ·重组表达质粒pET32-CapY108的酶切及测序鉴定 | 第23页 |
| ·重组表达质粒pET32-CapY108的表达 | 第23-24页 |
| ·表达蛋白的纯化与western blot鉴定 | 第24-25页 |
| ·Cap蛋白多克隆抗体效价的检测 | 第25页 |
| ·Cap蛋白多克隆抗体的Western blot检测 | 第25-26页 |
| 4 讨论 | 第26-27页 |
| 5 小结 | 第27-28页 |
| 第三章 鸭圆环病毒Cap基因酵母双杂交诱饵载体的构建 | 第28-36页 |
| 1 材料 | 第28页 |
| ·菌株和质粒 | 第28页 |
| ·主要试剂 | 第28页 |
| ·主要使用仪器 | 第28页 |
| 2 方法 | 第28-31页 |
| ·诱饵蛋白载体的构建与鉴定 | 第28-29页 |
| ·Cap基因密码子的优化 | 第28页 |
| ·重组质粒pGBKT7-Cap的构建 | 第28-29页 |
| ·重组质粒pGBKT7-Cap的鉴定 | 第29页 |
| ·酵母Y2HGold的检测 | 第29页 |
| ·酵母感受态细胞的制备 | 第29-30页 |
| ·酵母感受态细胞的转化 | 第30页 |
| ·重组蛋白的表达检测 | 第30页 |
| ·重组质粒pGBKT7-Cap对酵母细胞的毒性验证 | 第30页 |
| ·重组质粒pGBKT7-Cap对酵母细胞的自激活验证 | 第30-31页 |
| 3 结果 | 第31-34页 |
| ·重组质粒pGBKT7-Cap的酶切及测序鉴定 | 第31页 |
| ·重组蛋白的表达检测 | 第31-32页 |
| ·重组质粒pGBKT7-Cap对酵母宿主的毒性验证 | 第32-33页 |
| ·重组质粒pGBKT7-Cap对酵母宿主的自激活验证 | 第33-34页 |
| 4 讨论 | 第34-35页 |
| 5 小结 | 第35-36页 |
| 第四章 感染鸭圆环病毒脾脏的酵母双杂交cDNA文库构建 | 第36-44页 |
| 1 材料 | 第36页 |
| 2 方法 | 第36-40页 |
| ·鸭脾脏的总RNA抽提及电泳 | 第36-37页 |
| ·脾脏的总RNA抽提 | 第36页 |
| ·脾脏总RNA的电泳 | 第36-37页 |
| ·脾脏总RNA反转录cDNA | 第37页 |
| ·双链cDNA的扩增 | 第37-38页 |
| ·双链cDNA的纯化 | 第38-39页 |
| ·酵母菌Y187感受态的制备 | 第39页 |
| ·双链cDNA转化Y187感受态细胞 | 第39页 |
| ·文库的收集和鉴定 | 第39-40页 |
| 3 结果 | 第40-42页 |
| ·RNA的提取 | 第40页 |
| ·RNA反转录成cDNA | 第40-41页 |
| ·双链cDNA产物的扩增及其纯化 | 第41页 |
| ·文库的鉴定 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-43页 |
| 5 小结 | 第43-44页 |
| 第五章 筛选与Cap蛋白有相互作用的宿主蛋白 | 第44-49页 |
| 1 材料 | 第44页 |
| 2 方法 | 第44-45页 |
| ·诱饵菌株的浓缩 | 第44页 |
| ·文库菌与诱饵菌的杂交 | 第44-45页 |
| ·酵母双杂交阳性克隆的鉴定 | 第45页 |
| ·酵母质粒的抽提 | 第45页 |
| ·阳性酵母克隆的测序鉴定 | 第45页 |
| ·酵母双杂交阳性克隆的验证 | 第45页 |
| 3 结果 | 第45-46页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第45-46页 |
| ·阳性克隆的序列分析 | 第46页 |
| ·阳性克隆的酵母双杂验证 | 第46页 |
| 4 讨论 | 第46-47页 |
| 5 小结 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 附录 | 第54-57页 |
| 作者简介 | 第57页 |
| 攻读学位期间完成的学术论文目录 | 第57页 |
