| 本论文的创新性工作 | 第1-4页 |
| 中文摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 符号说明 | 第9-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-19页 |
| 1 鸭圆环病毒的检测技术 | 第13-14页 |
| 2 鸭圆环病毒的生物学特性 | 第14-15页 |
| 3 鸭圆环病毒的流行病学 | 第15页 |
| 4 鸭圆环病毒的致病性 | 第15页 |
| 5 圆环病毒科ORF3基因的研究 | 第15-18页 |
| 6 选题理由及意义 | 第18-19页 |
| 第二部分 试验研究 | 第19-52页 |
| 技术路线 | 第19-20页 |
| 第一章 鸭圆环病毒ORF3基因的生物信息学分析及克隆 | 第20-31页 |
| 1 实验材料 | 第20-21页 |
| ·实验病料、菌株 | 第20页 |
| ·主要实验仪器 | 第20-21页 |
| ·主要实验试剂 | 第21页 |
| ·主要试剂配制 | 第21页 |
| 2 实验方法 | 第21-23页 |
| ·DNA提取 | 第21-22页 |
| ·引物设计 | 第22页 |
| ·ORF3基因的扩增 | 第22-23页 |
| ·ORF3基因片段的回收纯化和T克隆 | 第23页 |
| ·DuCV ORF3基因的生物信息学分析 | 第23页 |
| 3 结果 | 第23-29页 |
| ·ORF3基因的克隆 | 第23-25页 |
| ·ORF3基因的生物信息学分析 | 第25-29页 |
| ·GH01株DuCV开放阅读框的查找 | 第25页 |
| ·ORF3基因的理化特征分析 | 第25页 |
| ·ORF3蛋白的二级结构预测 | 第25-26页 |
| ·ORF3保守区、信号肽和跨膜区预测 | 第26-27页 |
| ·ORF3蛋白的疏水性图谱分析 | 第27-28页 |
| ·ORF3蛋白功能位点预测 | 第28-29页 |
| ·ORF3蛋白的抗原决定簇分析 | 第29页 |
| 4 讨论 | 第29-31页 |
| 第二章 鸭圆环病毒ORF3蛋白的原核表达、纯化及检测 | 第31-39页 |
| 1 实验材料 | 第31-32页 |
| ·实验菌株、载体 | 第31页 |
| ·主要实验仪器 | 第31页 |
| ·主要实验试剂 | 第31-32页 |
| ·主要试剂配制 | 第32页 |
| 2 实验方法 | 第32-34页 |
| ·原核表达载体质粒的提取和与目的片段的连接 | 第32-33页 |
| ·融合蛋白诱导表达 | 第33页 |
| ·pGEX-6p-ORF3重组蛋白的纯化 | 第33页 |
| ·pET-32a-ORF3重组蛋白的亲和层析纯化及复性 | 第33-34页 |
| ·原核表达DuCV ORF3蛋白的Western Blot检测 | 第34页 |
| 3 结果 | 第34-37页 |
| ·ORF3基因原核表达载体的构建和鉴定 | 第34-35页 |
| ·ORF3融合蛋白的诱导表达 | 第35页 |
| ·ORF3重组蛋白的纯化 | 第35-36页 |
| ·ORF3蛋白的Western Blot检测 | 第36-37页 |
| 4 讨论 | 第37-39页 |
| 第三章 ORF3蛋白单克隆抗体的制备 | 第39-47页 |
| 1 实验材料 | 第39-40页 |
| ·实验细胞、动物、血清 | 第39页 |
| ·主要实验仪器 | 第39-40页 |
| ·主要实验试剂 | 第40页 |
| 2 实验方法 | 第40-42页 |
| ·间接ELISA方法的建立 | 第40页 |
| ·pET-32a-ORF3纯化蛋白免疫小鼠 | 第40-41页 |
| ·细胞融合 | 第41页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的克隆化 | 第41页 |
| ·腹水型单克隆抗体的制备 | 第41页 |
| ·单克隆抗体的Ig类鉴定 | 第41-42页 |
| ·腹水型单克隆抗体的效价测定 | 第42页 |
| ·腹水单抗的Western Blot检测 | 第42页 |
| 3 结果 | 第42-45页 |
| ·间接ELISA方法的建立 | 第42-43页 |
| ·杂交瘤细胞的筛选、稳定性检测及其腹水的制备 | 第43-44页 |
| ·腹水型单克隆抗体的亚类鉴定 | 第44页 |
| ·腹水型单克隆抗体的效价测定 | 第44-45页 |
| ·Western Blot检测腹水型单克隆抗体的特异性 | 第45页 |
| 4 讨论 | 第45-47页 |
| 第四章 单克隆抗体的间接竞争ELISA方法的建立及应用 | 第47-52页 |
| 1 实验材料 | 第47页 |
| ·实验血清 | 第47页 |
| ·主要实验仪器 | 第47页 |
| 2 实验方法 | 第47-48页 |
| ·单克隆抗体间接竞争ELISA法的建立 | 第47-48页 |
| ·单克隆抗体间接竞争ELISA法的特异性检测 | 第48页 |
| ·单克隆抗体间接竞争ELISA法的敏感性检测 | 第48页 |
| ·单克隆抗体间接竞争ELISA法的应用 | 第48页 |
| 3 结果 | 第48-51页 |
| ·ORF3单克隆抗体间接竞争ELISA检测方法的建立 | 第48-50页 |
| ·间接竞争ELISA的特异性检测 | 第50页 |
| ·间接竞争ELISA的敏感性检测 | 第50-51页 |
| ·单克隆抗体间接竞争ELISA法的应用 | 第51页 |
| 4 讨论 | 第51-52页 |
| 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
