| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 缩略词 | 第8-11页 |
| 第一章 携带IL24和MnSOD双基因溶瘤痘苗病毒抗癌作用研究 | 第11-43页 |
| ·引言 | 第11-13页 |
| ·癌症靶向基因病毒治疗 | 第11页 |
| ·溶瘤痘苗病毒简介 | 第11-12页 |
| ·溶瘤痘苗病毒的特点 | 第11-12页 |
| ·溶瘤痘苗病毒的改造 | 第12页 |
| ·IL24基因概述 | 第12-13页 |
| ·MnSOD基因概述 | 第13页 |
| ·实验目的和意义 | 第13页 |
| ·实验材料 | 第13-18页 |
| ·质粒与菌株 | 第13-14页 |
| ·痘苗病毒 | 第14页 |
| ·工具酶及生化试剂 | 第14-15页 |
| ·主要溶液及配制方法 | 第15-16页 |
| ·本实验所用到的细胞株 | 第16页 |
| ·实验仪器设备 | 第16-17页 |
| ·引物序列 | 第17-18页 |
| ·实验方法 | 第18-32页 |
| ·重组质粒构建常用方法 | 第18-20页 |
| ·重组质粒构建及病毒同源重组示意图 | 第20-23页 |
| ·重组质粒pCB-B18R-MnSOD的构建 | 第23-26页 |
| ·细胞的复苏 | 第26-27页 |
| ·细胞的传代 | 第27页 |
| ·细胞的冻存 | 第27页 |
| ·携带基因的溶瘤痘苗病毒OncoPox-MnSOD,OncoPox-IL24-MnSOD的包装 | 第27页 |
| ·药物筛选，挑空斑筛选目的病毒 | 第27-28页 |
| ·病毒基因组的抽提 | 第28-29页 |
| ·痘苗病毒的鉴定 | 第29页 |
| ·痘病毒滴度测定 | 第29页 |
| ·Vero-Cre稳转细胞系的构建 | 第29-30页 |
| ·Western blot检测MnSOD蛋白表达水平 | 第30-31页 |
| ·MTT检测 | 第31页 |
| ·痘病毒的大量扩增及纯化 | 第31页 |
| ·统计学分析 | 第31-32页 |
| ·实验结果 | 第32-42页 |
| ·pCB-B18R-Loxp-gpt-EGFP-Loxp的左臂的构建及鉴定结果 | 第32-33页 |
| ·pCB-B18R的右臂的构架及鉴定结果 | 第33-34页 |
| ·pCB-B18R-MnSOD质粒的构建及鉴定 | 第34-35页 |
| ·溶瘤痘苗病毒OncoPox-IL24-MnSOD的包装 | 第35-36页 |
| ·OncoPox-IL24-MnSOD重组病毒的鉴定 | 第36-37页 |
| ·OncoPox-MnSOD重组病毒的鉴定 | 第37-38页 |
| ·Western blot检测OncoPox-IL24-MnSOD、OncoPox-MnSOD病毒中MnSOD蛋白水平表达 | 第38-39页 |
| ·Vero细胞puro最小剂量的筛选 | 第39页 |
| ·puro筛选Cre表达阳性细胞 | 第39-40页 |
| ·Western blot检测Vero-Cre稳转株Cre酶的表达 | 第40页 |
| ·MTT检测重组病毒对肿瘤细胞的杀伤效果 | 第40-41页 |
| ·Hoechst33342染色法检测细胞凋亡 | 第41-42页 |
| ·结论 | 第42-43页 |
| 第二章 溶瘤腺病毒ZD55对类肝癌干细胞杀伤作用的研究 | 第43-58页 |
| ·引言 | 第43-44页 |
| ·实验材料 | 第44-45页 |
| ·试剂及试剂盒 | 第44页 |
| ·溶液配制 | 第44页 |
| ·抗体 | 第44页 |
| ·病毒 | 第44页 |
| ·细胞系 | 第44-45页 |
| ·主要的实验仪器 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-47页 |
| ·类肝癌干细胞球的悬浮培养 | 第45页 |
| ·病毒的滴度测定 | 第45-46页 |
| ·克隆形成实验 | 第46页 |
| ·MTT实验检测细胞活性 | 第46页 |
| ·结晶紫染色法检测细胞毒性 | 第46页 |
| ·小室侵袭实验 | 第46-47页 |
| ·Westen bloting实验 | 第47页 |
| ·细胞周期检测 | 第47页 |
| ·统计学分析 | 第47页 |
| ·结果 | 第47-56页 |
| ·无血清悬浮培养可以获得Sphere细胞 | 第47-48页 |
| ·Western blot检测Huh7 sphere细胞里蛋白表达的变化情况 | 第48-49页 |
| ·Huh7 sphere细胞具有耐药性 | 第49页 |
| ·Huh7 sphere细胞处于静息状态 | 第49-50页 |
| ·Huh7 sphere具有分化能力 | 第50-51页 |
| ·Huh7 sphere具有更强的侵袭能力 | 第51页 |
| ·Huh7 sphere细胞对THO, ZD55没有耐药性 | 第51-52页 |
| ·ZD55对Huh7 sphere细胞杀伤作用 | 第52-53页 |
| ·ZD55能诱导Huh7 sphere细胞凋亡 | 第53-55页 |
| ·Western blot检测ZD55通过caspase途径诱导Huh7 sphere细胞凋亡 | 第55-56页 |
| ·结论 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
