| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-14页 |
| ·丁醇简介 | 第7-12页 |
| ·丁醇理化性质 | 第7页 |
| ·丁醇的应用和优势 | 第7页 |
| ·丁醇的生产方法 | 第7-9页 |
| ·发酵法生产丁醇研究概况 | 第9-12页 |
| ·Red同源重组敲除法 | 第12页 |
| ·本课题的研究意义内容和来源 | 第12-14页 |
| ·基金来源 | 第12-13页 |
| ·研究意义 | 第13页 |
| ·研究内容 | 第13-14页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第14-25页 |
| ·实验材料 | 第14-17页 |
| ·菌种与质粒 | 第14页 |
| ·实验仪器设备和试剂 | 第14-16页 |
| ·实验所用的引物 | 第16-17页 |
| ·缓冲液 | 第17页 |
| ·培养基 | 第17页 |
| ·实验方法 | 第17-25页 |
| ·糖丁基梭菌基因组的提取 | 第17-18页 |
| ·丁醇途径关键酶的扩增 | 第18-19页 |
| ·重组质粒和产丁醇重组菌的构建 | 第19-21页 |
| ·重组菌的发酵 | 第21页 |
| ·宿主菌支路途径的敲除 | 第21-23页 |
| ·发酵条件的优化 | 第23-24页 |
| ·发酵产物的检测 | 第24-25页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第25-42页 |
| ·基因组提取并测序 | 第25页 |
| ·目的基因片段的扩增 | 第25-27页 |
| ·基因thlA，adhE的扩增 | 第26页 |
| ·融合PCR扩增bcs-operon | 第26-27页 |
| ·T载体连接bcs-operon | 第27-28页 |
| ·双酶切连接构建重组质粒 | 第28-31页 |
| ·质粒pRSFDute-thlA构建 | 第28-29页 |
| ·质粒pRSFDute-thlA-adhE构建 | 第29页 |
| ·质粒pETDuet-bcs构建 | 第29-30页 |
| ·重组质粒pRSFDute-thlA-adhE和pETDuet-bcs的双酶切验证 | 第30-31页 |
| ·大肠杆菌ldhA基因的敲除 | 第31-33页 |
| ·同源重组线性靶片段的扩增 | 第31-32页 |
| ·同源重组后验证 | 第32-33页 |
| ·抗性基因的消除 | 第33页 |
| ·重组菌的构建 | 第33-34页 |
| ·重组菌发酵测试及优化 | 第34-42页 |
| ·重组菌E. coli ECJ0 的初步发酵 | 第34-36页 |
| ·培养基优化 | 第36页 |
| ·需氧条件研究 | 第36-37页 |
| ·IPTG诱导浓度优化 | 第37-38页 |
| ·各培养条件下菌体生长情况比较 | 第38-39页 |
| ·E. coli ECJ0 和ECJ1 产丁醇能力比较 | 第39-40页 |
| ·碳源优化 | 第40页 |
| ·初始诱导浓度优化 | 第40-42页 |
| 主要结论与展望 | 第42-45页 |
| 主要结论 | 第42页 |
| 展望 | 第42-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| 附录A：溶剂标准曲线 | 第49-50页 |
| 附录B：作者在攻读硕士期间发表的论文 | 第50页 |