酸性α-淀粉酶基因的截短突变及性质研究
| 致谢 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| 1 文献综述 | 第8-16页 |
| ·酶的简介 | 第8-11页 |
| ·淀粉酶的简介 | 第9页 |
| ·α-淀粉酶 | 第9-10页 |
| ·α-淀粉酶分类 | 第10-11页 |
| ·酸性α-淀粉酶 | 第11-12页 |
| ·酸性α-淀粉酶耐酸机制 | 第11-12页 |
| ·酸性α-淀粉酶研究现状 | 第12页 |
| ·酸性α-淀粉酶的应用 | 第12页 |
| ·α-淀粉酶的结构与功能 | 第12-16页 |
| ·α-淀粉酶的催化机制及研究 | 第12-13页 |
| ·酶空间结构 | 第13页 |
| 1 3.3 截短突变的研究 | 第13-16页 |
| 2 引言 | 第16-17页 |
| 3 材料与方法 | 第17-29页 |
| ·材料 | 第17-19页 |
| ·菌株与载体 | 第17页 |
| ·试剂与药品 | 第17页 |
| ·所用试剂的配制 | 第17页 |
| ·培养基 | 第17-18页 |
| ·主要仪器 | 第18-19页 |
| ·有关试验单元的操作流程 | 第19-21页 |
| ·方法 | 第21-29页 |
| ·酸性α-淀粉酶的活力测定 | 第21-22页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第22页 |
| ·酸性α-淀粉酶基因的截短突变 | 第22-23页 |
| ·核酸片段的纯化与回收 | 第23页 |
| ·重组载体的构建 | 第23-24页 |
| ·酶切体系及酶连条件 | 第24-25页 |
| ·感受态细胞的制备及转化 | 第25-26页 |
| ·CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞及转化 | 第25页 |
| ·大肠杆菌阳性转化子的获得 | 第25-26页 |
| ·目的基因在大肠杆菌中的表达检测 | 第26页 |
| ·表达产物的纯化 | 第26-27页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第27页 |
| ·截短突变酸性α-淀粉酶的酶学性质的分析 | 第27-29页 |
| 4 结果与分析 | 第29-44页 |
| ·酸性α-淀粉酶基因的截短 | 第29-31页 |
| ·蛋白序列比对 | 第29-31页 |
| ·截短酸性α-淀粉酶基因的原核表达 | 第31-37页 |
| ·重组载体的构建 | 第31页 |
| ·pET21a-amy-△DE重组载体的酶切检测 | 第31-32页 |
| ·pET21a-amy-△E重组载体的酶切检测 | 第32-33页 |
| ·表达产物检测 | 第33页 |
| ·表达产物的纯化 | 第33-37页 |
| ·截短α-淀粉酶的基本酶学性质 | 第37-41页 |
| ·最适反应温度 | 第37-38页 |
| ·温度稳定性 | 第38页 |
| ·最适反应pH | 第38-39页 |
| ·pH稳定性 | 第39-41页 |
| ·动力学分析 | 第41-43页 |
| ·酶的吸附性分析 | 第43-44页 |
| 5 结论与讨论 | 第44-46页 |
| ·结论 | 第44页 |
| ·讨论 | 第44-46页 |
| ABSTRACT | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-49页 |
