| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 引言 | 第12-16页 |
| 第一章 基于报告基因靶向NF-κB通路的抑制剂筛选 | 第16-32页 |
| 前言 | 第16-17页 |
| 1 实验材料 | 第17-18页 |
| ·试剂 | 第17页 |
| ·仪器与设备 | 第17页 |
| ·细胞株 | 第17-18页 |
| 2 实验方法 | 第18-22页 |
| ·常用缓冲液及其他溶液配制 | 第18页 |
| ·小鼠单核巨噬细胞RAW264.7的复苏、传代及冻存 | 第18-19页 |
| ·质粒扩增 | 第19页 |
| ·pNF-κB-luc质粒与绿色荧光蛋白质粒共转染RAW264.7巨噬细胞 | 第19-20页 |
| ·RAW264.7巨噬细胞的转染 | 第20-21页 |
| ·报告基因的检测 | 第21-22页 |
| 3 实验结果 | 第22-29页 |
| ·质粒扩增并验证 | 第22-24页 |
| ·荧光观察pNF-κB-luc质粒与绿色荧光蛋白质粒成功共转染入RAW264.7巨噬细胞 | 第24页 |
| ·成功筛选出稳定转染pNF-κB-luc的RAW264.7细胞株 | 第24页 |
| ·成功构建基于报告基因靶向NF-κB通路的抑制剂筛选模型 | 第24-29页 |
| 4 讨论 | 第29-32页 |
| 第二章 雷公藤甲素衍生物LLDT-246对NF-κB信号通路相关分子的影响 | 第32-42页 |
| 前言 | 第32页 |
| 1 实验材料 | 第32-33页 |
| ·试剂 | 第32-33页 |
| ·仪器与设备 | 第33页 |
| ·细胞株 | 第33页 |
| 2 实验方法 | 第33-37页 |
| ·常用缓冲液及其他溶液配制 | 第33-34页 |
| ·肿瘤细胞常规培养 | 第34页 |
| ·LLDT-246对HCT116细胞中组成型及诱导型NF-κB活化的测定 | 第34-35页 |
| ·LLDT-246对HCT116细胞中TNF-α诱导的IκB及p-IκB表达的测定 | 第35-36页 |
| ·LLDT-246对HCT116细胞中TNF介导的P65核转运的影响 | 第36-37页 |
| ·LLDT-246对HCT116细胞中NF-κB下游靶蛋白表达的测定 | 第37页 |
| 3 实验结果 | 第37-39页 |
| ·LLDT-246对HCT116细胞中组成型及诱导型NF-κB活化的影响 | 第37-38页 |
| ·LLDT-246对HCT116细胞中TNFα诱导的IκB及p-IκB表达的影响 | 第38页 |
| ·LLDT-246对HCT116细胞中TNF介导的P65入核转运的影响 | 第38-39页 |
| ·LLDT-246对HCT116细胞中NF-κB下游靶蛋白的作用 | 第39页 |
| 4 讨论 | 第39-42页 |
| 第三章 雷公藤甲素衍生物LLDT-246的抗肿瘤活性及靶向NF-κB通路机制初探 | 第42-60页 |
| 前言 | 第42页 |
| 1 实验材料 | 第42-43页 |
| ·试剂 | 第42-43页 |
| ·仪器与设备 | 第43页 |
| ·细胞株 | 第43页 |
| 2 实验方法 | 第43-50页 |
| ·常用缓冲液及其他溶液配制 | 第43-44页 |
| ·肿瘤细胞常规培养 | 第44页 |
| ·LLDT-246对结肠癌及正常细胞系的细胞毒 | 第44-45页 |
| ·SRB法检测LLDT-246与TNF α联合给药对HCT116、HT-29、Caco-2细胞毒 | 第45页 |
| ·LLDT-246对HCT116细胞中凋亡相关蛋白PARP的检测 | 第45-46页 |
| ·LLDT-246对HCT116细胞中凋亡相关蛋白Caspase-3的检测 | 第46页 |
| ·LLDT-246对HCT116细胞中凋亡相关蛋白Caspase-9的检测 | 第46页 |
| ·LLDT-246对HCT116细胞中凋亡相关蛋白Caspase-8的检测 | 第46-47页 |
| ·LLDT-246对HCT116细胞中组成型p53表达的检测 | 第47页 |
| ·IKKβ激酶抑制剂分子水平的筛选 | 第47-48页 |
| ·LLDT-246对HCT116细胞中组成型p-mTOR表达的检测 | 第48页 |
| ·LLDT-246对HCT116细胞中组成型p-AKT表达的检测 | 第48-49页 |
| ·LLDT-246对HCT116细胞中组成型p-GSK3β表达的检测 | 第49页 |
| ·LLDT-246对HCT116细胞中组成型p-STAT3表达的检测 | 第49页 |
| ·LLDT-246对HCT116细胞中组成型p-JNK表达的检测 | 第49-50页 |
| ·LLDT-246对HCT116细胞中组成型p-ERK表达的检测 | 第50页 |
| 3 实验结果 | 第50-58页 |
| ·LLDT-246对结肠癌及正常细胞系的细胞毒作用 | 第50-51页 |
| ·LLDT-246与TNF-α联合给药对HCT116、HT-29、Caco-2细胞的细胞毒作用 | 第51-52页 |
| ·LLDT-246对HCT116细胞凋亡相关蛋白PARP剪切的影响 | 第52-53页 |
| ·LLDT-246对HCT116细胞中凋亡相关蛋白Caspase-3剪切的影响 | 第53页 |
| ·LLDT-246对HCT116细胞中凋亡相关蛋白Caspase-9剪切的影响 | 第53-54页 |
| ·LLDT-246对HCT116细胞中凋亡相关蛋白Caspase-8剪切的影响 | 第54页 |
| ·LLDT-246对HCT116细胞中组成型p53的影响 | 第54-55页 |
| ·IKKβ激酶抑制剂分子水平的筛选 | 第55页 |
| ·LLDT-246对HCT116细胞中组成型p-mTOR的影响 | 第55页 |
| ·LLDT-246对HCT116细胞中组成型p-AKT的影响 | 第55-56页 |
| ·LLDT-246对HCT116细胞中组成型p-GSK3β的影响 | 第56页 |
| ·LLDT-246对HCT116细胞中组成型p-STAT3的影响 | 第56-57页 |
| ·LLDT-246对HCT116细胞中组成型p-JNK的影响 | 第57页 |
| ·LLDT-246对HCT116细胞中组成型p-ERK的影响 | 第57-58页 |
| 4 讨论 | 第58-60页 |
| 结论与展望 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-65页 |
