| 摘要 | 第1-17页 |
| ABSTRACT | 第17-24页 |
| 符号说明 | 第24-27页 |
| 第一章 Parthenolide通过激活内质网应激诱导非小细胞肺癌细胞凋亡 | 第27-94页 |
| 前言 | 第27-53页 |
| 1 肿瘤 | 第27-28页 |
| ·肿瘤及肿瘤治疗 | 第27-28页 |
| ·肺癌及肺癌治疗 | 第28页 |
| 2 细胞凋亡 | 第28-36页 |
| ·细胞凋亡的概念 | 第28页 |
| ·细胞凋亡的特征 | 第28-29页 |
| ·细胞凋亡的信号通路 | 第29-35页 |
| ·细胞凋亡与肿瘤 | 第35-36页 |
| 3 细胞周期 | 第36-39页 |
| ·细胞周期的概念 | 第36-37页 |
| ·细胞周期的监控 | 第37-38页 |
| ·细胞周期与肿瘤 | 第38-39页 |
| 4 内质网应激 | 第39-43页 |
| ·内质网的结构和功能 | 第39页 |
| ·内质网应激的概念 | 第39页 |
| ·内质网应激信号通路 | 第39-41页 |
| ·内质网应激与细胞凋亡 | 第41-43页 |
| ·内质网应激与肿瘤 | 第43页 |
| 5 肿瘤干细胞 | 第43-49页 |
| ·干细胞的特征和功能 | 第43-44页 |
| ·肿瘤干细胞的定义 | 第44-45页 |
| ·肿瘤干细胞的来源假说 | 第45页 |
| ·肿瘤干细胞标记物 | 第45-46页 |
| ·肿瘤干细胞与临床治疗 | 第46-47页 |
| ·上皮细胞-间充质转化 | 第47-49页 |
| 6 Parthenolide | 第49-53页 |
| ·Parthenolide的结构和应用 | 第49页 |
| ·Parthenolide的功能 | 第49-53页 |
| 材料材料与方法 | 第53-69页 |
| 1. 实验材料 | 第53-56页 |
| ·细胞株 | 第53页 |
| ·实验药品 | 第53页 |
| ·实验试剂 | 第53-54页 |
| ·实验抗体 | 第54-55页 |
| ·实验耗材 | 第55页 |
| ·实验仪器 | 第55-56页 |
| 2. 主要溶液及试剂配方 | 第56-61页 |
| ·肿瘤细胞培养所用试剂及配方 | 第56-57页 |
| ·细菌培养基配方 | 第57页 |
| ·蛋白质裂解相关试剂及配方 | 第57-58页 |
| ·蛋白免疫印迹所用试剂及配方 | 第58-60页 |
| ·SRB所用试剂及配方 | 第60-61页 |
| 3. 实验方法 | 第61-69页 |
| ·肿瘤细胞培养 | 第61-62页 |
| ·质粒提取及转染 | 第62-64页 |
| ·SRB方法检测细胞增殖 | 第64页 |
| ·MTT方法检测细胞增殖 | 第64页 |
| ·Western Blot检测蛋白表达 | 第64-66页 |
| ·流式检测细胞周期 | 第66-67页 |
| ·siRNA干扰实验 | 第67页 |
| ·流式检测细胞凋亡 | 第67-69页 |
| 实验结果 | 第69-90页 |
| 1 Parthenolide抑制NF-κB活性 | 第69页 |
| 2 Parthenolide抑制非小细胞肺癌细胞的存活 | 第69-70页 |
| 3 Parthenolide诱导非小细胞肺癌细胞周期阻滞 | 第70-72页 |
| ·Parthenolide以浓度依赖的方式诱导A549细胞GO/G1细胞周期阻滞 | 第70-71页 |
| ·Parthenolide以浓度依赖的方式诱导H1792细胞G2/M细胞周期阻滞 | 第71-72页 |
| 4 Parthenolide诱导非小细胞肺癌细胞凋亡 | 第72-74页 |
| ·Parthenolide以浓度依赖的方式诱导非小细胞肺癌细胞中caspase级联反应 | 第72-73页 |
| ·Parthenolide以时间依赖的方式诱导非小细胞肺癌细胞中caspase级联反应 | 第73-74页 |
| 5 Parthenolide通过上调DR5诱导非小细胞肺癌细胞外源途径凋亡 | 第74-76页 |
| ·Parthenolide以浓度依赖的方式诱导非小细胞肺癌细胞中DR5表达上调 | 第74页 |
| ·Parthenolide以时间依赖的方式诱导非小细胞肺癌细胞中DR5表达上调 | 第74-75页 |
| ·敲除DR5抑制Parthenolide诱导的caspase级联反应 | 第75页 |
| ·敲除DR5抑制Parthenolide诱导的非小细胞肺癌细胞的凋亡 | 第75-76页 |
| 6 c-FLIP参与Parthenolide诱导的非小细胞肺癌细胞外源途径凋亡 | 第76-79页 |
| ·Parthenolide以浓度依赖的方式抑制非小细胞肺癌细胞中c-FLIP表达 | 第76-77页 |
| ·Parthenolide以时间依赖的方式抑制非小细胞肺癌细胞中c-FLIP表达 | 第77页 |
| ·过表达c-FLIPL抑制Parthenolide诱导的caspase级联反应 | 第77-78页 |
| ·过表达c-FLIPL抑制Parthenolide诱导的非小细胞肺癌细胞的凋亡 | 第78-79页 |
| 7 Parthenolide通过上调NOXA,下调Mcl-1诱导非小细胞肺癌细胞内源途径凋亡 | 第79-82页 |
| ·Parthenolide以浓度依赖的方式上调非小细胞肺癌细胞中NOXA表达,下调Mcl-1的表达 | 第79-80页 |
| ·Parthenolide以时间依赖的方式上调非小细胞肺癌细胞中NOXA表达,下调Mcl-1的表达 | 第80页 |
| ·敲除NOXA抑制Parthenolide诱导的Mcl-1表达下调和caspase级联反应 | 第80-81页 |
| ·敲除NOXA抑制Parthenolide诱导的非小细胞肺癌细胞的凋亡 | 第81-82页 |
| 8 Parthenolide通过触发内质网应激诱导非小细胞肺癌细胞凋亡 | 第82-85页 |
| ·Parthenolide以浓度依赖的方式上调非小细胞肺癌细胞中ATF4和CHOP的表达 | 第82页 |
| ·Parthenolide以时间依赖的方式上调非小细胞肺癌细胞中ATF4和CHOP的表达 | 第82-83页 |
| ·敲除ATF4抑制Parthenolide诱导的CHOP表达上调和caspase级联反应 | 第83-84页 |
| ·敲除CHOP抑制Parthenolide诱导的DR5和NOXA表达上调以及caspase级联反应 | 第84页 |
| ·Parthenolide诱导内质网应激相关蛋白表达上调 | 第84-85页 |
| 9 Parthenolide选择性杀伤类肿瘤干细胞 | 第85-90页 |
| ·E-cad缺失使非小细胞肺癌细胞表达干细胞标记基因 | 第85-86页 |
| ·Parthenolide选择性抑制A549/shE-cad细胞存活 | 第86页 |
| ·Parthenolide在A549/shE-cad细胞中诱导更强caspase级联反应 | 第86-87页 |
| ·Parthenolide诱导的抗凋亡蛋白表达下调,促凋亡蛋白表达上调在A549/shE-cad细胞中进一步增强 | 第87-88页 |
| ·Parthenolide在A549/shE-cad细胞中诱导更强的内质网应激 | 第88页 |
| ·敲除CHOP抑制Parthenolide在A549/shE-cad细胞中诱导的NOXA表达和caspase级联反应 | 第88-90页 |
| 讨论 | 第90-94页 |
| 第二章 内吞蛋白Numb及NumbL调控非小细胞肺癌细胞膜表面DR5 | 第94-133页 |
| 前言 | 第94-113页 |
| 1 膜泡运输 | 第94-97页 |
| ·膜泡运输的概念 | 第94页 |
| ·膜泡运输的步骤 | 第94-95页 |
| ·膜泡运输的调控 | 第95-96页 |
| ·膜泡运输的分类 | 第96-97页 |
| 2 内吞 | 第97-101页 |
| ·内吞的分类 | 第97-98页 |
| ·内吞的机制 | 第98-99页 |
| ·内吞后膜泡的运输 | 第99-100页 |
| ·内吞的功能 | 第100页 |
| ·内吞和肿瘤 | 第100-101页 |
| 3 死亡配体及其受体的内吞 | 第101-105页 |
| ·CD95及其受体的内吞 | 第101-102页 |
| ·TNF及其受体的内吞 | 第102页 |
| ·TRAIL及其受体的内吞 | 第102-105页 |
| 4 内吞蛋白Numb | 第105-111页 |
| ·Numb的结构 | 第105-106页 |
| ·Numb各结构的功能 | 第106-107页 |
| ·Numb的分布 | 第107-108页 |
| ·Numb的功能 | 第108-111页 |
| 5 内吞蛋白NumbL | 第111-113页 |
| ·NumbL的结构 | 第111页 |
| ·NumbL的功能 | 第111-113页 |
| 实验材料与方法(见第一部分) | 第113-118页 |
| 1 实验材料 | 第113-114页 |
| ·实验试剂 | 第113-114页 |
| ·实验抗体 | 第114页 |
| ·主要实验仪器 | 第114页 |
| 2. 主要溶液及试剂配方 | 第114-115页 |
| ·Immunoprecipitation蛋白质裂解相关试剂及配方 | 第114页 |
| ·免疫荧光相关试剂及配方 | 第114-115页 |
| 3. 实验方法 | 第115-118页 |
| ·质粒构建 | 第115页 |
| ·流式检测细胞膜表面蛋白 | 第115-116页 |
| ·免疫荧光 | 第116页 |
| ·免疫沉淀 | 第116-118页 |
| 实验结果 | 第118-130页 |
| 1 抗肿瘤药物通过上调非小细胞肺癌细胞DR5表达诱导凋亡 | 第118-120页 |
| ·SAHA以浓度梯度依赖的方式上调非小细胞肺癌细胞caspase级联反应 | 第118-119页 |
| ·SAHA以浓度梯度依赖的方式上调非小细胞肺癌细胞DR5表达 | 第119页 |
| ·SAHA以时间梯度依赖的方式上调非小细胞肺癌细胞DR5表达 | 第119页 |
| ·敲除DR5抑制SAHA诱导的非小细胞肺癌细胞caspases级联反应 | 第119-120页 |
| 2 抗肿瘤药物上调非小细胞肺癌细胞膜上的DR5 | 第120-122页 |
| 3 抑制溶酶体途径上调非小细胞肺癌细胞DR5表达 | 第122-123页 |
| ·Bafilomycin-A1促进PEM诱导的非小细胞肺癌细胞中DR5表达上调 | 第122页 |
| ·E-64d促进SAHA诱导的非小细胞肺癌细胞中DR5表达上调 | 第122-123页 |
| 4 抗肿瘤药物通过下调Numb和NumbL调控非小细胞肺癌细胞内DR5含量 | 第123-127页 |
| ·Numb与NumbL在多种非小细胞肺癌细胞中表达 | 第123-124页 |
| ·抗肿瘤药物下调非小细胞肺癌细胞中Numb和NumbL的含量 | 第124页 |
| ·敲除Numb和NumbL上调非小细胞肺癌细胞内DR5蛋白含量和抗肿瘤药物诱导的caspase级联反应 | 第124-126页 |
| ·过表达Numb和NumbL下调非小细胞肺癌细胞内DR5蛋白含量和抗肿瘤药物诱导的caspase级联反应 | 第126-127页 |
| 5 Numb和NumbL调控非小细胞肺癌细胞内DR5在细胞膜表面上的分布 | 第127-129页 |
| 6 Numb以及NumbL可以与DR5直接结合 | 第129-130页 |
| 讨论 | 第130-133页 |
| 参考文献 | 第133-154页 |
| 致谢 | 第154-155页 |
| 学位论文发表情况 | 第155-156页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第156页 |
