| 目录 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 缩略语表 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-27页 |
| ·sRNA及其调控机制 | 第10-12页 |
| ·sRNA的分类 | 第10-11页 |
| ·真核生物中sRNA的类别及调控机制 | 第11页 |
| ·原核生物sRNA的类别及调节机制 | 第11-12页 |
| ·细菌中sRNA的研究现状 | 第12-23页 |
| ·细菌中sRNA的分类 | 第12-13页 |
| ·sRNA介导调控的特点 | 第13-14页 |
| ·Hfq在sRNA调控中的作用 | 第14-15页 |
| ·sRNA的研究方法 | 第15-18页 |
| ·sRNA靶标的筛选及鉴定 | 第18-19页 |
| ·人工反式编码特殊sRNA对细菌基因进行沉默 | 第19-20页 |
| ·细菌sRNAs在不同压力条件下的调控 | 第20-23页 |
| ·根瘤菌中sRNA的研究现状 | 第23-25页 |
| ·根瘤菌简介 | 第23-24页 |
| ·根瘤菌中sRNA的研究进展 | 第24页 |
| ·根瘤菌中sRNA研究存在的问题 | 第24-25页 |
| ·研究目的及意义 | 第25-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-43页 |
| ·实验材料 | 第27-33页 |
| ·供试菌株和质粒 | 第27页 |
| ·抗生素 | 第27-28页 |
| ·缓冲液与试剂 | 第28-32页 |
| ·培养基 | 第32-33页 |
| ·方法 | 第33-43页 |
| ·基本分子生物学操作方法 | 第33页 |
| ·蛋白质的纯化 | 第33-34页 |
| ·免疫抗体的制备 | 第34-35页 |
| ·Western Blotting | 第35页 |
| ·植物盆栽实验 | 第35页 |
| ·根瘤菌类菌体RNA提取 | 第35-36页 |
| ·胁迫条件处理根瘤菌7653R | 第36页 |
| ·PAGE-Northern杂交的实验方法 | 第36-38页 |
| ·甲醛变性琼脂糖胶进行RNA杂交的实验方法 | 第38-40页 |
| ·体外转录制备RNA杂交探针 | 第40页 |
| ·EDC化学交联法 | 第40-41页 |
| ·荧光定量PCR | 第41页 |
| ·RACE PCR | 第41-42页 |
| ·DNA和sRNA序列分析软件 | 第42-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-58页 |
| ·分析RGS1基因在7653R基因组中的同源性 | 第43页 |
| ·RGS1是否编码蛋白质的检测 | 第43-47页 |
| ·克隆RGS1基因含保守结构域的开放阅读框 | 第44页 |
| ·构建RGS1蛋白表达载体 | 第44-45页 |
| ·体外诱导目的蛋白的表达 | 第45-46页 |
| ·Western Blotting检测目标蛋白产物 | 第46-47页 |
| ·确定RGS1基因是否属于一种sRNA | 第47-50页 |
| ·反转录实验 | 第47-48页 |
| ·sRNA二级结构预测 | 第48-50页 |
| ·RACE扩增RGS1基因全长序列 | 第50-52页 |
| ·RACE扩增RGS1的3’和5’序列 | 第50-51页 |
| ·TA克隆并测序 | 第51页 |
| ·RGS1 cDNA全长拼接 | 第51-52页 |
| ·RGS1在培养条件和共生根瘤中的表达量分析 | 第52页 |
| ·RGS1突变对上下游结构基因表达的影响 | 第52-55页 |
| ·RGS1上下游结构基因分析 | 第52-53页 |
| ·Real-time PCR测定RGS1上下游结构基因的表达变化 | 第53-55页 |
| ·RGS1剪切前体的初步检测分析 | 第55-58页 |
| ·RNA探针的制备 | 第55-57页 |
| ·Northern Blotting检测sRNA RGS1的表达前体 | 第57-58页 |
| 4 讨论和研究设想 | 第58-61页 |
| ·讨论 | 第58-60页 |
| ·研究设想 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 附录 | 第66-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
