| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 第一章 磷酸化对Ahi1与Hap1A相互作用影响的机理研究 | 第12-40页 |
| 前言 | 第12-13页 |
| 第一节 神经营养因子对Hap1A磷酸化的影响研究 | 第13-26页 |
| 1 仪器与材料 | 第13-16页 |
| ·研究对象 | 第13页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第13-16页 |
| ·主要试验仪器 | 第13页 |
| ·主要试剂与耗材 | 第13-15页 |
| ·主要试剂的配置 | 第15-16页 |
| 2 实验方法 | 第16-22页 |
| ·PC12细胞培养 | 第16-18页 |
| ·培养条件 | 第16-17页 |
| ·细胞传代 | 第17页 |
| ·细胞冻存 | 第17-18页 |
| ·细胞的冻融(复苏) | 第18页 |
| ·各种神经营养因子刺激 | 第18页 |
| ·蛋白样品的制备 | 第18页 |
| ·样品蛋白浓度测定 | 第18-19页 |
| ·Western Blotting步骤 | 第19-21页 |
| ·PC12细胞的免疫荧光步骤 | 第21-22页 |
| 3 结果 | 第22-24页 |
| ·不同的神经营养因子通过不同的信号通路调节Hap1A的磷酸化 | 第22-23页 |
| ·NGF处理后Hap1A和Ahi1在细胞中的分布 | 第23-24页 |
| 4 分析和讨论 | 第24-25页 |
| 5 结论 | 第25-26页 |
| 第二节 Hap1A磷酸化对Ahi1与Hap1A相互作用的影响研究 | 第26-40页 |
| 1 仪器与材料 | 第26-30页 |
| ·研究对象 | 第26页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第26-30页 |
| ·主要试验仪器 | 第26-27页 |
| ·主要试验试剂与耗材 | 第27-28页 |
| ·主要试剂的配置 | 第28-30页 |
| 2 实验方法 | 第30-36页 |
| ·PC12细胞培养 | 第30-31页 |
| ·培养条件 | 第30页 |
| ·细胞传代 | 第30-31页 |
| ·NGF刺激和细胞蛋白样品的制备 | 第31页 |
| ·细胞转染 | 第31-32页 |
| ·小鼠蛋白样品的制备 | 第32页 |
| ·免疫共沉淀 | 第32-33页 |
| ·亚细胞分离 | 第33-34页 |
| ·Western Blotting步骤 | 第34-35页 |
| ·PC12细胞的免疫荧光步骤 | 第35-36页 |
| 3 结果 | 第36-38页 |
| 4 分析和讨论 | 第38-39页 |
| 5 结论 | 第39-40页 |
| 第二章 Ahi1基因敲除小鼠模型的构建及行为学 | 第40-58页 |
| 第一节 Ahi基因敲除小鼠模型的构建 | 第40-51页 |
| 1 仪器与材料 | 第40-44页 |
| ·研究对象 | 第40页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第40-44页 |
| ·主要试验仪器 | 第40-41页 |
| ·主要试验试剂与耗材 | 第41-42页 |
| ·主要溶液的配置 | 第42-44页 |
| 2 实验方法 | 第44-48页 |
| ·实验技术路线 | 第44页 |
| ·Ahi1基因敲除小鼠基因型鉴定 | 第44-46页 |
| ·小鼠基因组DNA的提取 | 第44-45页 |
| ·引物设计 | 第45页 |
| ·PCR反应体系（表2-1,表2-2) | 第45-46页 |
| ·rCR反应条件 | 第46页 |
| ·PCR扩增产物检测 | 第46页 |
| ·小鼠蛋白样品的制备 | 第46-47页 |
| ·Western Blotting步骤 | 第47-48页 |
| 3 结果 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-50页 |
| 5 结论 | 第50-51页 |
| 第二节 Ahi基因敲除小鼠模型的行为学研究 | 第51-58页 |
| 1 仪器与材料 | 第51页 |
| ·研究对象 | 第51页 |
| ·主要试验仪器 | 第51页 |
| 2 实验方法 | 第51-53页 |
| ·小鼠体重及形态学观察 | 第51页 |
| ·小鼠自主活动实验(Locomotor Activity) | 第51页 |
| ·小鼠强迫游泳实验(Forced Swim Test,FST) | 第51-52页 |
| ·小鼠悬尾实验(Tail Suspension Test) | 第52-53页 |
| ·小鼠滚轮实验(Rotarod Test) | 第53页 |
| ·统计方法 | 第53页 |
| 3 结果 | 第53-56页 |
| 4 讨论 | 第56-57页 |
| 5 结论 | 第57-58页 |
| 第三章 Ahi1通过调节其互作蛋白CEND1介导神经分化的研究 | 第58-90页 |
| 第一节 Ahi1互作蛋白的筛查 | 第58-68页 |
| 1 仪器与材料 | 第58-61页 |
| ·研究对象 | 第58页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第58-61页 |
| ·主要试验仪器 | 第58-59页 |
| ·主要试验试剂与耗材 | 第59-60页 |
| ·主要溶液的配置 | 第60-61页 |
| 2 实验方法 | 第61-65页 |
| ·实验技术路线 | 第61-62页 |
| ·小鼠蛋白样品的制备 | 第62页 |
| ·免疫共沉淀 | 第62-63页 |
| ·质谱分析 | 第63页 |
| ·Western Blotting步骤 | 第63-65页 |
| 3 结果 | 第65-67页 |
| 4 讨论 | 第67页 |
| 5 结论 | 第67-68页 |
| 第二节 Ahi1 KO小鼠中CEND1表达量的检测 | 第68-77页 |
| 1 仪器与材料 | 第68-71页 |
| ·研究对象 | 第68页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第68-71页 |
| 2 实验方法 | 第71-74页 |
| ·小鼠蛋白提取 | 第71页 |
| ·Western Blotting | 第71-73页 |
| ·小鼠标本取材及切片的制备 | 第73-74页 |
| ·小鼠脑片的免疫荧光 | 第74页 |
| 3 结果 | 第74-76页 |
| 4 结论 | 第76-77页 |
| 第三节 Ahi1与CEND1相互作用及其对神经突起分化的影响 | 第77-90页 |
| 1 仪器与材料 | 第77-81页 |
| ·研究对象 | 第77页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第77-81页 |
| ·主要试验仪器 | 第77-78页 |
| ·主要试剂与耗材 | 第78-79页 |
| ·主要溶液的配置 | 第79-81页 |
| 2 实验方法 | 第81-85页 |
| ·细胞培养条件 | 第81页 |
| ·PC12细胞的培养条件 | 第81页 |
| ·N2A细胞的培养条件 | 第81页 |
| ·小鼠下丘脑原代神经元培养 | 第81-82页 |
| ·细胞转染及NGF处理,Cend1半衰期实验 | 第82页 |
| ·Western Blotting | 第82-84页 |
| ·细胞免疫荧光步骤 | 第84-85页 |
| 3 结果 | 第85-88页 |
| ·Ahi1蛋白稳定Cend1水平 | 第85页 |
| ·Cend1的表达能减轻Ahi1突变引起的神经元分化异常 | 第85-88页 |
| 4 讨论 | 第88-90页 |
| 结论 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-98页 |
| 综述 | 第98-117页 |
| 参考文献 | 第106-117页 |
| 攻读学位期间主要的研究成果 | 第117-118页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
