| 目录 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 英文缩写表 | 第13-15页 |
| 1 文献综述 | 第15-25页 |
| ·结核病 | 第15-16页 |
| ·世界结核病疫情 | 第15页 |
| ·我国结核病疫情 | 第15页 |
| ·结核病简介 | 第15-16页 |
| ·结核病分类 | 第16页 |
| ·结核病历史 | 第16页 |
| ·结核分枝杆菌 | 第16-18页 |
| ·结核分枝杆菌的形态 | 第17页 |
| ·结核分枝杆菌细胞壁成分 | 第17页 |
| ·结核分枝杆菌的抗酸染色 | 第17页 |
| ·结核分枝杆菌的生长特性 | 第17-18页 |
| ·结核分枝杆菌的生化特点 | 第18页 |
| ·结核分枝杆菌的抵抗力 | 第18页 |
| ·结核分枝杆菌的对抗药物 | 第18页 |
| ·热休克蛋白 | 第18-21页 |
| ·热休克蛋白的简介 | 第18-19页 |
| ·热休克蛋白 90 的结构 | 第19-20页 |
| ·热休克蛋白 90 的功能 | 第20-21页 |
| ·CRISPR/Cas 系统 | 第21-24页 |
| ·CRISPR/Cas 系统的简介 | 第21-22页 |
| ·CRISPR/Cas 系统的结构 | 第22-23页 |
| ·CRISPR/Cas 系统的功能 | 第23页 |
| ·CRISPR/Cas 系统的作用过程 | 第23-24页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第24-25页 |
| 2 结核分枝杆菌 HtpG 蛋白的表达和纯化 | 第25-48页 |
| ·实验材料 | 第25-28页 |
| ·质粒 | 第25页 |
| ·菌株 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25-26页 |
| ·常用缓冲液及其它溶液 | 第26-27页 |
| ·主要仪器 | 第27-28页 |
| ·实验方法 | 第28-38页 |
| ·Rv2299c 基因编码的蛋白质生物信息学分析 | 第28页 |
| ·Rv2299c 基因的克隆 | 第28-30页 |
| ·重组质粒 pET28a- Rv2299c 和 pMV261H- Rv2299c 的构建和鉴定 | 第30-33页 |
| ·重组质粒 pET28a-Rv2299c 在大肠杆菌中的诱导表达与纯化 | 第33-34页 |
| ·重组质粒 pMV261H-Rv2299c 在耻垢分枝杆菌的转化与鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组质粒 pMV261H-Rv2299c 在耻垢分枝杆菌中的诱导表达及 WB 鉴定 | 第35-37页 |
| ·His-HtpG 融合蛋白的结晶及初步衍射 | 第37-38页 |
| ·结果和分析 | 第38-46页 |
| ·Rv2299c 基因编码的蛋白质生物信息学分析 | 第38页 |
| ·结核分枝杆菌 H37Rv 基因组提取 | 第38-39页 |
| ·目的基因 Rv2299c 的 PCR 扩增 | 第39页 |
| ·pET28a-Rv2299c 和 pMV261H- Rv2299c 重组载体初步验证 | 第39-40页 |
| ·pET28a-Rv2299c 和 pMV261H-Rv2299c 重组载体测序验证 | 第40-41页 |
| ·His- HtpG 融合蛋白的表达和纯化 | 第41-43页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第43-44页 |
| ·重组质粒 pMV261H-Rv2299c 在耻垢分枝杆菌中的 PCR 鉴定 | 第44-45页 |
| ·重组质粒 pMV261H-Rv2299c 在耻垢分枝杆菌中的诱导表达的 WB 鉴定 | 第45页 |
| ·His-HtpG 融合蛋白结晶及晶体的初步衍射分析 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| 3 CrRNA 的制备 | 第48-58页 |
| ·实验材料 | 第48-49页 |
| ·主要试剂 | 第48页 |
| ·常用溶液 | 第48-49页 |
| ·主要仪器 | 第49页 |
| ·实验方法 | 第49-53页 |
| ·目的基因的二级结构预测 | 第49页 |
| ·模板的制备 | 第49-50页 |
| ·引物的合成 | 第50页 |
| ·目的基因的扩增和纯化 | 第50-51页 |
| ·目的基因的转录 | 第51-52页 |
| ·CrRNA 的 PAGE 检测 | 第52页 |
| ·CrRNA 的纯化 | 第52-53页 |
| ·结果和分析 | 第53-56页 |
| ·目的基因的二级结构预测 | 第53-54页 |
| ·目的基因的 PCR 扩增 | 第54-55页 |
| ·目的基因的转录 | 第55页 |
| ·目的基因的纯化 | 第55-56页 |
| ·讨论 | 第56-58页 |
| ·模板的制备 | 第56页 |
| ·引物的合成 | 第56-57页 |
| ·目的基因的 PCR 扩增 | 第57页 |
| ·目的基因的转录和纯化 | 第57-58页 |
| 4 HtpG 蛋白与 CrRNA 的结合作用 | 第58-63页 |
| ·实验材料 | 第58-59页 |
| ·主要试剂 | 第58页 |
| ·常用缓冲液及其它溶液 | 第58-59页 |
| ·主要仪器 | 第59页 |
| ·实验方法 | 第59-61页 |
| ·CrRNA 的去磷酸化处理 | 第59页 |
| ·CrRNA 的同位素标记 | 第59-60页 |
| ·标记后的 RNA 与蛋白的孵育 | 第60页 |
| ·非变性的聚丙烯凝胶电泳检测 | 第60-61页 |
| ·同位素放射自显影 | 第61页 |
| ·结果和分析 | 第61-62页 |
| ·讨论 | 第62-63页 |
| 5 结论与展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
