| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 常用缩写词 | 第13-15页 |
| 1 前言 | 第15-20页 |
| ·APOBEC家族概述 | 第15-17页 |
| ·APOBEC分子的胞苷脱氨作用 | 第17-18页 |
| ·猪内源性反转录病毒与异种移植的病毒安全性 | 第18-19页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第19-20页 |
| 2.材料与方法 | 第20-33页 |
| ·材料 | 第20-21页 |
| ·实验动物 | 第20页 |
| ·菌株、细胞株及质粒 | 第20页 |
| ·主要实验试剂 | 第20页 |
| ·细胞培养用品 | 第20页 |
| ·主要仪器 | 第20-21页 |
| ·基本溶液配制 | 第21页 |
| ·稳定表达猪APOBEC3F的PK15细胞株的建立 | 第21-26页 |
| ·PBMC总RNA的制备 | 第21-22页 |
| ·引物合成及PCR扩增 | 第22-23页 |
| ·重组质粒MSCV-FLAG-A3F-GFP的构建及鉴定 | 第23-25页 |
| ·假型病毒的包装 | 第25页 |
| ·假型病毒感染PK15细胞 | 第25页 |
| ·稳定表达猪APOBEC3F的PK15单克隆细胞的筛选 | 第25页 |
| ·PCR检测猪APOBEC3F在PK15细胞中的整合 | 第25-26页 |
| ·Western blot检测猪APOBEC3F在PK15细胞中的表达 | 第26页 |
| ·猪APOBEC3F对PERV的抑制作用验证 | 第26-29页 |
| ·相对荧光定量PCR评价猪APOBEC3F对PERV的影响 | 第26-27页 |
| ·针对猪APOBEC3F siRNA载体的构建及鉴定 | 第27-28页 |
| ·相对荧光定量PCR评价沉默猪APOBEC3F对PERV的影响 | 第28-29页 |
| ·猪APOBEC3F与PERV-Gag相互作用验证 | 第29-30页 |
| ·pGBKT7-SsA3F与pGADT7-Gag质粒的构建及鉴定 | 第29-30页 |
| ·pGBKT7-SsA3F与pGADT7-Gag共转化AH1 09酵母 | 第30页 |
| ·PERV包装猪APOBEC3F蛋白验证 | 第30-31页 |
| ·病毒分离及收集 | 第30-31页 |
| ·Western blot鉴定PERV包装猪APOBEC3F | 第31页 |
| ·猪APOBEC3F对PERV的超突变效应检测 | 第31-33页 |
| ·检测引物的设计与合成 | 第31页 |
| ·细胞基因组的提取 | 第31-32页 |
| ·PCR扩增 | 第32页 |
| ·检测基因的克隆、测序及比对 | 第32-33页 |
| 3.结果 | 第33-50页 |
| ·稳定表达猪APOBEC3F的PK15细胞株的建立及鉴定结果 | 第33-37页 |
| ·重组质粒pMSCV-FLAG-A3F-GFP的构建及鉴定结果 | 第33-34页 |
| ·假型病毒感染PK15细胞鉴定 | 第34-36页 |
| ·稳定表达猪APOBEC3F的PK15细胞系的筛选结果 | 第36页 |
| ·稳定表达猪APOBEC3F的PK15细胞PCR检测结果 | 第36-37页 |
| ·稳定表达猪AP0BEC3F的PK15细胞Westenr blot鉴定结果 | 第37页 |
| ·猪APOBEC3F对PERV的抑制作用验证 | 第37-42页 |
| ·相对荧光定量PCR评价猪APOBEC3F对PERV的抑制作用 | 第37-39页 |
| ·针对猪AP0BEC3F siRNA载体的构建及鉴定结果 | 第39-40页 |
| ·沉默猪APOBEC3F对PERV的影响结果 | 第40-42页 |
| ·猪APOBEC3F与PERV-Gag相互作用的验证 | 第42-46页 |
| ·重组质粒pGBKT7-SsA3F和pGADT7-Gag的鉴定 | 第42-44页 |
| ·猪APOBEC3F与PERV-Gag相互作用的验证结果 | 第44-46页 |
| ·PERV粒子包装猪APOBEC3F结果 | 第46-47页 |
| ·病毒DNA序列G→A超突变分析 | 第47-50页 |
| 4.讨论 | 第50-56页 |
| ·猪APOBEC3F在PK15细胞中的稳定表达 | 第50-51页 |
| ·猪APOBEC3F分子对PERV的抑制 | 第51-52页 |
| ·病毒对APOBEC分子的包装 | 第52-53页 |
| ·APOBEC分子的超突变效应及其靶点偏好性 | 第53-54页 |
| ·病毒对APOBEC分子的免疫拮抗 | 第54-56页 |
| 5.结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 在读学位期间发表的论文情况 | 第65页 |
