| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-15页 |
| 前言 | 第15-18页 |
| 技术路线 | 第18-21页 |
| 第一章 LPS所致KLF4 mRNA和蛋白质的时空表达模式 | 第21-35页 |
| ·材料与方法 | 第21-24页 |
| ·材料 | 第21-22页 |
| ·主要材料与试剂 | 第21-22页 |
| ·主要仪器 | 第22页 |
| ·引物 | 第22页 |
| ·方法 | 第22-24页 |
| ·细胞培养及处理 | 第22页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第22-23页 |
| ·逆转录聚合酶链反应(RT-PCR) | 第23页 |
| ·免疫印迹分析(Western blot) | 第23-24页 |
| ·统计学处理 | 第24页 |
| ·结果 | 第24-33页 |
| ·LPS处理不同时间KLF4在人THP-1单核细胞中的表达 | 第24-25页 |
| ·不同浓度LPS处理后KLF4在人THP-1单核细胞中的表达 | 第25-27页 |
| ·LPS处理不同时间KLF4在人U937单核巨噬细胞中的表达 | 第27-28页 |
| ·不同浓度LPS处理后KLF4在人U937单核巨噬细胞中的表达 | 第28-30页 |
| ·LPS处理不同时间KLF4在小鼠RAW264.7巨噬细胞中的表达 | 第30-31页 |
| ·不同浓度LPS处理后KLF4在小鼠RAW264.7巨噬细胞中的表达 | 第31-33页 |
| ·分析与讨论 | 第33-34页 |
| ·结论 | 第34-35页 |
| 第二章 KLF4对LPS诱导的早期炎症介质基因IL-1β和IL-10表达和释放的影响及机制探讨 | 第35-61页 |
| ·材料和方法 | 第35-41页 |
| ·材料 | 第35-37页 |
| ·主要材料和试剂 | 第35-36页 |
| ·主要仪器 | 第36页 |
| ·引物及寡核苷酸序列 | 第36-37页 |
| ·方法 | 第37-41页 |
| ·细胞培养及处理 | 第37页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第37-38页 |
| ·逆转录聚合酶链反应(RT-PCR) | 第38-39页 |
| ·酶联免疫吸附实验(enzyme linked immuno-sorbent assay,ELISA) | 第39页 |
| ·生物信息学数据分析 | 第39页 |
| ·质粒构建 | 第39-40页 |
| ·脂质体转染 | 第40页 |
| ·细胞核蛋白的提取 | 第40-41页 |
| ·凝胶电泳迁移率分析(EMSA) | 第41页 |
| ·双荧光素酶报告基因分析 | 第41页 |
| ·统计学处理 | 第41页 |
| ·结果 | 第41-59页 |
| ·生物信息学分析启动子区含有KLF4结合元件的炎症介质基因 | 第41-42页 |
| ·pcDNA3.1-KLF4重组质粒的构建 | 第42-43页 |
| ·KLF4过表达的RAW264.7细胞株的鉴定 | 第43-44页 |
| ·内源性KLF4的表达抑制 | 第44-46页 |
| ·KLF4对促炎介质IL-1β表达及释放的影响 | 第46-49页 |
| ·KLF4过表达对IL-1β mRNA表达的影响 | 第46-47页 |
| ·KLF4过表达对IL-1β释放的影响 | 第47页 |
| ·内源性KLF4表达抑制对IL-1β释放的影响 | 第47-49页 |
| ·KLF4对抗炎介质IL-10表达及释放的影响 | 第49-52页 |
| ·KLF4过表达对IL-10 mRNA表达的影响 | 第49-50页 |
| ·KLF4过表达对IL-10释放的影响 | 第50-51页 |
| ·内源性KLF4表达抑制对IL-10释放的影响 | 第51-52页 |
| ·KLF4调控IL-1β和IL-10表达的机制 | 第52-59页 |
| ·小鼠IL-1β和IL-10基因启动子的生物信息学分析 | 第52-53页 |
| ·KLF4与IL-1β和IL-10基因启动子区KLF4元件的结合 | 第53-54页 |
| ·LPS处理对KLF4与IL-1β和IL-10基因启动子区KLF4元件结合的影响 | 第54-56页 |
| ·KLF4对IL-1β和IL-10基因启动子转录活性的影响 | 第56-57页 |
| ·DNA结合结构域缺失对KLF4调控IL-1β和IL-10基因转录的影响 | 第57-59页 |
| ·分析与讨论 | 第59-60页 |
| ·结论 | 第60-61页 |
| 第三章 KLF4对晚期炎症介质基因HMGB1表达和释放的影响及机制探讨 | 第61-81页 |
| ·材料和方法 | 第61-65页 |
| ·材料 | 第61-63页 |
| ·主要材料和试剂 | 第61-62页 |
| ·主要仪器 | 第62页 |
| ·引物及寡核苷酸序列 | 第62-63页 |
| ·方法 | 第63-65页 |
| ·细胞培养及处理 | 第63页 |
| ·免疫印迹分析(Westernblot) | 第63页 |
| ·生物信息学数据分析 | 第63页 |
| ·质粒构建 | 第63-64页 |
| ·脂质体转染 | 第64页 |
| ·免疫荧光细胞化学技术 | 第64页 |
| ·细胞核蛋白的提取 | 第64-65页 |
| ·凝胶电泳迁移率分析(EMSA) | 第65页 |
| ·统计学处理 | 第65页 |
| ·结果 | 第65-79页 |
| ·KLF4过表达对RAW264.7细胞中HMGB1表达的影响 | 第65-68页 |
| ·KLF4过表达对RAW264.7细胞中HMGB1 mRNA表达的影响 | 第65-66页 |
| ·KLF4过表达对RAW264.7细胞中HMGB1蛋白表达的影响 | 第66-67页 |
| ·间接免疫荧光技术检测KLF4过表达对RAW264.7细胞中HMGB1蛋白表达的影响 | 第67-68页 |
| ·内源性KLF4表达抑制对HMGB1表达的影响 | 第68-71页 |
| ·内源性KLF4表达抑制对HMGB1 mRNA表达的影响 | 第68-70页 |
| ·内源性KLF4表达抑制对HMGB1蛋白表达的影响 | 第70-71页 |
| ·LPS刺激下KLF4对HMGB1表达、移位及释放的影响 | 第71-76页 |
| ·KLF4过表达对LPS刺激下HMGB1表达、移位及释放的影响 | 第71-74页 |
| ·内源性KLF4表达抑制对LPS刺激下HMGB1表达及释放的影响 | 第74-76页 |
| ·KLF4调控HMGB1表达的机制 | 第76-79页 |
| ·小鼠HMGB1基因启动子的生物信息学分析 | 第76页 |
| ·KLF4与HMGB1基因启动子区KLF4元件的结合 | 第76-79页 |
| ·分析与讨论 | 第79-80页 |
| ·结论 | 第80-81页 |
| 讨论 | 第81-83页 |
| 总结论 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-91页 |
| 综述Ⅰ | 第91-105页 |
| 综述Ⅱ | 第105-120页 |
| 攻读学位期间主要的研究成果目录 | 第120-122页 |
| 致谢 | 第122页 |
