多杀性巴氏杆菌毒素单克隆抗体的制备及初步应用
| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 缩略词表(ABBREVIATION) | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-21页 |
| ·猪萎缩性鼻炎及其危害 | 第10-11页 |
| ·猪萎缩性鼻炎的病原学 | 第11-13页 |
| ·多杀性巴氏杆菌毒素的生物学特性 | 第13-15页 |
| ·猪进行性萎缩性鼻炎诊断技术研究进展 | 第15-19页 |
| ·病原学诊断 | 第15-17页 |
| ·血清学检测 | 第17-18页 |
| ·X射线检查 | 第18-19页 |
| ·猪萎缩性鼻炎的防制 | 第19-21页 |
| ·环境净化 | 第19页 |
| ·疫苗预防 | 第19-20页 |
| ·药物治疗 | 第20-21页 |
| 2 研究目的和意义 | 第21-22页 |
| 3 材料与方法 | 第22-33页 |
| ·材料 | 第22-24页 |
| ·菌种、质粒及细胞 | 第22页 |
| ·试验动物 | 第22页 |
| ·血清 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22-23页 |
| ·主要试剂配制 | 第23-24页 |
| ·方法 | 第24-33页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第24页 |
| ·表达蛋白的鉴定 | 第24页 |
| ·重组可溶蛋白与不可溶蛋白(包涵体)的分离 | 第24-25页 |
| ·包涵体的变性及复性 | 第25页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第25-28页 |
| ·单克隆抗体的鉴定 | 第28-30页 |
| ·单抗竞争ELISA方法的建立 | 第30-32页 |
| ·单抗竞争ELISA方法的临床应用 | 第32-33页 |
| 4 结果与分析 | 第33-44页 |
| ·重组蛋白的提取 | 第33页 |
| ·PMT-C和PMT-N间接ELISA方法的确定 | 第33页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第33-34页 |
| ·细胞融合后结果的观察 | 第33-34页 |
| ·融合后筛选及克隆化培养结果 | 第34页 |
| ·单抗的鉴定 | 第34-37页 |
| ·Western-blot鉴定 | 第34-35页 |
| ·单抗中和活性的测定 | 第35页 |
| ·染色体计数结果 | 第35-36页 |
| ·单抗的效价(腹水)、Ig亚型及相对亲和力的测定 | 第36页 |
| ·单抗的表位分析 | 第36页 |
| ·稳定性检测 | 第36-37页 |
| ·单抗竞争ELISA方法的建立 | 第37-43页 |
| ·单抗的纯化 | 第37页 |
| ·抗原包被浓度和酶标抗体工作浓度 | 第37-38页 |
| ·血清最适稀释度的选择 | 第38页 |
| ·阴阳界线的确定 | 第38-39页 |
| ·封闭液的选择 | 第39页 |
| ·血清稀释液的选择 | 第39-40页 |
| ·血清温育时间的选择 | 第40-41页 |
| ·特异性试验 | 第41页 |
| ·敏感性试验 | 第41页 |
| ·批内重复性试验 | 第41页 |
| ·批间重复性试验 | 第41-42页 |
| ·符合试验 | 第42-43页 |
| ·单抗竞争ELISA检测方法的临床初步应用 | 第43-44页 |
| 5 讨论 | 第44-48页 |
| ·关于单抗的制备 | 第44-45页 |
| ·关于单抗竞争ELISA方法的建立及初步应用 | 第45-48页 |
| 6 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 附录 | 第57页 |
