| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 第一章 马传染性贫血病毒基因转移载体研究进展 | 第12-30页 |
| ·基因转移载体的类型 | 第12-15页 |
| ·非病毒载体系统 | 第12-13页 |
| ·病毒载体系统 | 第13-15页 |
| ·马传染性贫血病毒概述 | 第15页 |
| ·马传染性贫血病毒的分子生物学特性 | 第15-20页 |
| ·EIAV 基因组结构及其功能 | 第16页 |
| ·EIAV 的基因及其编码蛋白 | 第16-20页 |
| ·EIAV 非编码区LTR 相关研究进展 | 第20-22页 |
| ·马传染性贫血病毒的生活周期 | 第22-24页 |
| ·EIAV 基因转移载体的构建原理 | 第24-28页 |
| ·EIAV 基因转移载体质粒 | 第24-25页 |
| ·EIAV 基因转移载体的包装系统 | 第25-26页 |
| ·EIAV 载体的囊膜伪型化 | 第26-27页 |
| ·EIAV 基因转移载体的优化 | 第27-28页 |
| ·EIAV 基因转移载体的应用 | 第28-29页 |
| ·本研究的背景、内容和意义 | 第29-30页 |
| 第二章 马传染性贫血病毒基因转移载体质粒的优化 | 第30-54页 |
| ·材料 | 第30-34页 |
| ·细胞、菌种和质粒 | 第30页 |
| ·主要分子生物学试剂 | 第30-32页 |
| ·引物设计合成 | 第32页 |
| ·细菌培养基及常用缓冲液的配制 | 第32-33页 |
| ·主要仪器设备 | 第33-34页 |
| ·方法 | 第34-41页 |
| ·PCR 扩增WPRE 和CAG 核心启动子 | 第34-35页 |
| ·PCR 产物的纯化及其与pGM-T 载体的连接 | 第35页 |
| ·新鲜大肠杆菌感受态细胞DH5α的制备(CaCl_2 法) | 第35-36页 |
| ·连接产物转化感受态大肠杆菌DH5α | 第36页 |
| ·重组质粒pGM-WPRE 和pGM-CAGp 的提取 | 第36-37页 |
| ·重组质粒pGM-WPRE 阳性克隆的筛选与鉴定 | 第37页 |
| ·重组质粒pGM-CAGp 阳性克隆的筛选与鉴定 | 第37-38页 |
| ·pGM-WPRE 和pcPPTPRE（+）的NotⅠ酶切与回收 | 第38页 |
| ·重组质粒pcPPTWPRE 的制备 | 第38-39页 |
| ·重组质粒pcPPTWPRE 阳性克隆的筛选与鉴定 | 第39页 |
| ·pGM-CAGp 和pcPPTWPRE 的KpnⅠ酶切与回收 | 第39页 |
| ·重组质粒pcPPTEIACAGp 的制备 | 第39-40页 |
| ·重组质粒pcPPTEIACAGp 阳性克隆的筛选与鉴定 | 第40页 |
| ·转染用EIAV 基因转移载体质粒的制备 | 第40-41页 |
| ·EIAV 基因转移载体质粒的转染 | 第41页 |
| ·EGFP 表达量的观察与比较 | 第41页 |
| ·结果 | 第41-50页 |
| ·WPRE 及CAG 核心启动子的PCR 扩增结果 | 第41-42页 |
| ·重组质粒pGM-WPRE 阳性克隆的鉴定结果 | 第42-43页 |
| ·重组质粒pGM-CAGp 阳性克隆的鉴定结果 | 第43-44页 |
| ·重组质粒pGM-WPRE 和pGM-CAGp 测序结果 | 第44页 |
| ·pGM-WPRE 和pcPPTPRE（+）的酶切 | 第44-45页 |
| ·重组质粒pcPPTWPRE 阳性克隆的鉴定结果 | 第45-46页 |
| ·pGM-CAGp 和pcPPTWPRE 的酶切 | 第46页 |
| ·重组质粒pcPPTEIACAGp 阳性克隆的鉴定结果 | 第46-47页 |
| ·转染用EIAV 载体质粒的浓度测定及转染方案 | 第47页 |
| ·EGFP 蛋白在荧光显微镜下的观察结果 | 第47-49页 |
| ·流式细胞仪的检测结果 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50-54页 |
| ·WPRE 提高了EIAV 载体质粒的外源蛋白表达能力 | 第50-51页 |
| ·CAG 核心启动子与CMVIE 启动子的比较 | 第51-52页 |
| ·EIAV 载体质粒宿主细胞的选择 | 第52页 |
| ·影响磷酸钙转染法转染效率的因素 | 第52-54页 |
| 第三章 鸡β-肌动蛋白第一内含子对EIAV 载体质粒外源蛋白表达能力的影响 | 第54-67页 |
| ·材料 | 第54-56页 |
| ·细胞、菌种和质粒 | 第54页 |
| ·主要分子生物学试剂 | 第54-56页 |
| ·TSS 溶液的配制 | 第56页 |
| ·主要仪器设备 | 第56页 |
| ·方法 | 第56-59页 |
| ·质粒pcPPTWPRE 和pCAGG-MCS 的Sal ? 酶切 | 第56页 |
| ·线性质粒pcPPTWPRE 和pCAGG-MCS 的Apa ? 酶切 | 第56页 |
| ·线性质粒pcPPTWPRE 和pCAGG-MCS 的Kpn ? 酶切 | 第56-57页 |
| ·酶切产物的纯化回收 | 第57页 |
| ·含部分内含子的CAG 启动子与pcPPTWPRE 载体的连接 | 第57页 |
| ·全长CAG 启动子与pcPPTWPRE 载体的连接 | 第57页 |
| ·新鲜大肠杆菌感受态细胞DH5α的制备(TSS 一步法) | 第57-58页 |
| ·连接产物转化感受态大肠杆菌DH5α | 第58页 |
| ·重组质粒pWCAGP0.8 和pWCAGP1.6 的提取 | 第58页 |
| ·重组质粒pWCAGP0.8 阳性克隆的筛选与鉴定 | 第58页 |
| ·重组质粒pWCAGP1.6 阳性克隆的筛选与鉴定 | 第58-59页 |
| ·转染用EIAV 基因转移载体质粒的制备 | 第59页 |
| ·EIAV 基因转移载体质粒的转染 | 第59页 |
| ·EGFP 表达量的观察与比较 | 第59页 |
| ·结果 | 第59-63页 |
| ·重组质粒的SalⅠ和ApaⅠ双酶切 | 第59页 |
| ·重组质粒pWCAGP0.8 阳性克隆的鉴定结果 | 第59-60页 |
| ·重组质粒的SalⅠ和KpnⅠ双酶切 | 第60-61页 |
| ·重组质粒pWCAGP1.6 阳性克隆的鉴定结果 | 第61页 |
| ·转染用质粒的浓度测定及转染方案 | 第61页 |
| ·EGFP 蛋白在荧光显微镜下的观察结果 | 第61-62页 |
| ·流式细胞仪的检测结果 | 第62-63页 |
| ·讨论 | 第63-67页 |
| ·内含子对基因表达调控的影响 | 第63-65页 |
| ·内含子对EIAV 载体质粒蛋白表达能力的影响 | 第65-67页 |
| 第四章 马传染性贫血病毒gag/pol 蛋白表达载体的改造 | 第67-83页 |
| ·材料 | 第67-69页 |
| ·细胞和菌种 | 第67页 |
| ·质粒 | 第67页 |
| ·主要实验试剂 | 第67页 |
| ·主要仪器设备 | 第67-69页 |
| ·引物设计合成 | 第69页 |
| ·方法 | 第69-73页 |
| ·PCR 扩增RRE 片断和5′端RU5 区 | 第69-70页 |
| ·RRE 和RU5 区PCR 产物的纯化回收 | 第70页 |
| ·重组质粒pCDGPR 的构建 | 第70页 |
| ·重组质粒pCDGPR 阳性克隆的筛选与鉴定 | 第70-71页 |
| ·重组质粒pRU5GPR 的构建 | 第71页 |
| ·重组质粒pRU5GPR 阳性克隆的筛选与鉴定 | 第71-72页 |
| ·重组质粒pCDGPR 和pRU5GPR 的定点突变 | 第72页 |
| ·重组质粒pCDSGPR 和pSRU5GPR 阳性克隆的筛选 | 第72-73页 |
| ·转染用EIAV gag/pol 蛋白表达载体的制备 | 第73页 |
| ·EIAV gag/pol 蛋白表达载体的体外表达与检测 | 第73页 |
| ·结果 | 第73-79页 |
| ·RRE 片断和RU5 区的PCR 扩增 | 第73页 |
| ·重组质粒pCDGPR 阳性克隆的鉴定 | 第73-75页 |
| ·重组质粒pRU5GPR 阳性克隆的鉴定 | 第75页 |
| ·RU5 和RRE 的测序结果及分析 | 第75-76页 |
| ·SOE-PCR 法定点突变的扩增结果 | 第76-77页 |
| ·重组质粒pCDSGPR 和pSRU5GPR 的构建 | 第77-78页 |
| ·SOE-PCR 定点突变的测序结果及分析 | 第78页 |
| ·EIAV gag/pol 表达载体的浓度测定及转染方案 | 第78-79页 |
| ·EIAV 蛋白表达载体转染后的表达 | 第79页 |
| ·讨论 | 第79-83页 |
| ·关于质粒pOK8266 与pOK8266T | 第79-80页 |
| ·RRE 对EIAV gag/pol 载体表达的影响 | 第80页 |
| ·EIAV 5′-LTR RU5 区对EIAV gag/pol 载体表达的影响 | 第80页 |
| ·关于SOE-PCR 定点突变 | 第80-81页 |
| ·关于EIAV 蛋白表达载体的IFA 检测结果 | 第81-83页 |
| 结论 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 作者简介 | 第94页 |
